CAT#:JW-13-21200
低温运输，-20℃保存

刚地弓形虫电泳法PCR试剂盒

产品及特点
刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种可感染包括人在内所有温血动物的细胞内寄生原虫，对人畜的危害很大，孕妇感染弓形虫后导致早产、流产、胎儿发育畸形，是当今致畸胎的四大原因之一，也是免疫功能低下患者死亡的主要原因（如 AIDS 病人等）。传统的显微镜病原体检查方法，检出率低；以抗体检测为主的血清学诊断方法不能准确反映弓形虫现时感染情况。PCR 检测技术的发展为解决这些问题提供了更灵敏的方法。本产品就是以 PCR 技术为基础开发的专门检测刚地弓形虫的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据刚地弓形虫DNA高度保守区设计，分析发现它只能检测刚地弓形虫，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 mL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成  份                                                                       编号                       规格               包装材料
2×PCR MasterMix                                                        990805              0.5 mL    0.5 mL本色盖
超纯水                                                                       210806                  1 mL       1.5 mL蓝盖管
刚地弓形虫PCR引物干粉                                        yw14-21200yl          50 次       0.5 mL白盖管
刚地弓形虫PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL）    pc21200-MG00344    250 mL    0.5 mL黄盖管
使用手册                                                                13-21200sc               1份               1份

注意：1、引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
2、为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL，本试剂盒提供）10 mL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20 mL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                                                   N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR MasterMix                                               各10 mL              10 mL                    10 mL
刚地弓形虫PCR引物混合液                                  各2 mL               2 mL                    2 mL
制备的N+2个DNA样品                                           各8 mL              不加                    不加
超纯水                                                                       不加               8 mL                   不加
刚地弓形虫PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL）        不加                不加                   8 mL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                   温度    时间
预变性               95℃    10分钟
PCR反应
（30个循环）    95℃    30秒
                          55℃    60秒
                          65℃    60秒
延伸                  72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10 mL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为187 bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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