CAT#:JW-13-3780
低温运输，-20℃保存

小麦基腐病菌电泳法PCR试剂盒

产品及特点
小麦基腐病菌（Pseudocercosprella Herpotrichoides var. aucformis，又名：Oculimacula Acuformis或Tapesia. Acuformis）是真菌，主要引起小麦基腐病。小麦基腐病菌主要侵染小麦、大麦、燕麦等麦类植物，其发病特征为：返青期至起身期侵染但地上部不显症、拔节至孕穗期爆发流行使植株出现黄叶或死蘖、齐穗至灌浆期大量死亡导致枯株白穗等。小麦基腐病造成小麦大量减产，严重影响种植业发展。因此快速检测小麦基腐病菌具有重要的意义。为此，本公司以电泳法PCR技术为基础开发了专门检测小麦基腐病菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据小麦基腐病菌DNA高度保守区设计，分析发现它只能检测小麦基腐病菌，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20 mL体系的常规PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用5孔盒包装
成份                                            编号        规格            包装
2×PCR MasterMix                  990805        0.5 mL    0.5mL本色盖
超纯水                                     210806        1 mL    1.5mL蓝盖管
小麦基腐病菌PCR
引物干粉                            yw15-3780kw    50 次    0.5mL白盖管
小麦基腐病菌PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL）    pc3780-87906    250 mL    0.5mL黄盖管
使用手册                            13-3780sc         1份      无
注意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备物品
样品DNA

使用方法
一、样品DNA的制备
1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照（1×10E4拷贝/mL，本试剂盒提供）10 mL加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。
2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应（20 mL体系）
3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成份                                    N+2个样品管    PCR阴性对照    PCR阳性对照
2×PCR Master Mix                    各10 mL        10 mL        10 mL
小麦基腐病菌PCR引物混合液    各2 mL         2 mL         2 mL
制备的N+2个DNA样品                各8 mL        不加           不加
超纯水                                          不加            8 mL         不加
小麦基腐病菌PCR阳性对照
（1×10E4拷贝/mL）                     不加           不加          8 mL
4.上机进行PCR，PCR反应参数为:
过程                 温度       时间
预变性               95℃     10分钟
PCR反应
（30个循环）    95℃     30秒
                          60℃     60秒
延伸                   72℃    10分钟

三、电泳分析
5.取10 mL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。
6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为在74bp。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或PCR阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂，设备，程序，操作等），需要重复并排查原因。
7.如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。

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