CAT#:JW-11-N221199
低温运输，-20℃保存

大肠杆菌RNaseIII, 2U/uL

产品及特点
大肠杆菌RNaseIII来源于重组E. coli菌株，通过克隆表达融合有麦芽糖结合蛋白的E. coli RNase III 基因（rnc）而得到。它能将较长双链RNA切割成一组大小不同的由18-25 bp组成的小片段干扰RNA (siRNA)。此反应示意图如下：

它具有下列特点：
1.可以体外制备任何哺乳动物细胞基因RNA干扰所需的siRNA。
2.高效，用1.5个单位（1μL）的大肠杆菌RNaseIII能够将1μg的dsRNA完全切割成siRNA。
3.可以用于去除其他反应系统中的双链RNA（dsRNAs）分子。
4.本产品无核酸内切酶和核酸外切酶污染。
5.本产品仅供科研使用。

规格及成分
成份                                           编号            规格          包装
大肠杆菌RNaseIII, 2U/uL    11-N221199a    100uL     0.5mL红盖管
10×大肠杆菌RNaseIII
反应缓冲液                         11-N221199b    1mL      1.5mL白盖管
EDTA溶液，500mM          11-N221199c     1mL      1.5mL蓝盖管
MnCl2溶液，200mM         11-N221199d     1mL      1.5mL黄盖管
使用手册                            11-N221199sc    1份           无
本试剂盒采用五孔盒包装

运输及保存   
低温运输，-20℃保存，有效期为24个月。

自备试剂
待消化的双链RNA（dsRNAs）

使用方法
1.依次按下表顺序加入下列试剂：
成分                                                    体积
用户自备dsRNA                                XuL（10ug）
10×大肠杆菌RNaseIII反应缓冲液     10 uL
大肠杆菌RNaseIII, 2U/uL                  10 uL
MnCl2溶液，200mM                         0 uL
超纯水                                               补水到100 uL
2.混匀并在37℃孵育20分钟。
3.加入10uL 500mM EDTA 终止反应。不能加热灭活大肠杆菌RNaseIII，否则siRNA的产量会降低。

参考资料
一、酶单位定义
一个单位是指在50uL的总反应体积中，在 37℃下20分钟内能将1 ug dsRNA消化成siRNA所需的酶量。
二、核酸外切酶活性的质检标准
包含1 μg单链和双链[ 3H]大肠杆菌DNA和至少10 U 大肠杆菌RNaseIII的50uL反应体系，在37℃时孵育4小时后释放的放射性<0.1%。
三、非特异性DNase活性的质检标准
包含1ug Lambda-HindIII DNA和至少6U 大肠杆菌RNaseIII的50uL反应体系在37℃时孵育16小时无电泳可见的DNA降解。
四、蛋白质纯度质检标准
    SDS-PAGE电泳后考马斯蓝染色的纯度不低于95%。
五、RNase活性的质检标准
包含40ng长度为300nt的ssRNA及2U大肠杆菌RNaseIII的10uL大肠杆菌RNaseIII反应体系37℃时孵育16小时后电泳检测>90%的底物RNA保持完整。

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