CAT#:JW-11-220847  
常温运输，4℃保存

mRNA核酸纯化试剂盒（磁珠法）

产品及特点
本试剂盒是从总RNA中分离纯化高纯度mRNA的试剂盒。大多数真核生物的mRNA在其3’端都有Poly(A)尾，采用特殊设计的耦联Oligo dT磁珠与之杂交实现mRNA的分离。纯化得到mRNA可用于cDNA文库构建、二代测序、Northern blot 等相关实验。它具有下列特点：
1.即开即用，操作简单。
2.运用磁珠为介质，具有较强的分离能力。
3.使用Oligo dT寡核苷酸能特异性的将mRNA从总RNA中分离出来。
4.分离的mRNA可用于下游的测序等工作。
5.本试剂盒足够10次的mRNA分离。
6.本产品仅供科研使用。

规格及成分
成份                                编号               规格            包装
裂解/结合缓冲液           11-220847a      2mL        5mL本色瓶
清洗缓冲液                   11-220847b      4mL         5mL本色瓶
Oligo dT磁珠                11-220847c      100mL      0.5mL白色管
RNase-Free ddH2O     11-220847d      2mL         5mL本色瓶
使用手册                       11-220847sc    1份            无
本试剂盒采用小扁盒包装

运输及保存   
常温运输，4℃保存，有效期为1年。

自备试剂
磁力架，RNase-Free PCR管，RNase-Free的吸头等

使用方法
注意：请使用RNase-Free和DNase-Free的枪头、离心管进行实验。本试剂盒中裂解/结合缓冲液在实验过程中请小心吹打，避免产生过多气泡影响实验结果。总RNA样品中应无DNA、盐离子(Mg2+、胍盐)、有机试剂残留，否则可能导致RNA降解或捕获效率降低。
一、mRNA捕获磁珠预处理
1.将Oligo dT 磁珠从4℃冰箱取出，室温放置5 min，涡旋混匀。吸取10mL Oligo dT磁珠于RNase-Free PCR管中，置于磁力架上1 min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
2.将RNase-Free PCR管从磁力架上取出，加入50 mL裂解/结合缓冲液，小心吸吹磁珠，将磁珠混匀后放置在磁力架上1min，待溶液澄清，小心吸弃上清。
3.再次加入50 mL裂解/结合缓冲液重复洗涤一次。
4.最后加入50 mL裂解/结合缓冲液，将磁珠重悬于50 mL裂解/结合缓冲液，室温放置备用。
二、样品RNA的制备
将总量0.1-4mg的总RNA用RNase-Free ddH2O稀释至50 mL，并置于冰上备用。
三、PCR反应
5.mRNA捕获反应体系，按下表加入各反应试剂：
成分                                        体积
处理后的mRNA捕获磁珠        50 mL
总RNA                                    50 mL
总体积                                    100 mL
6.将配置好的反应体系吹打混匀后，执行以下程序（置于PCR仪中，启用热盖99-105℃均可），按下表时间-温度参数进行反应:
温度    时间
65℃    2 min
20℃    5 min
4℃    ∞
7.将反应液取出置于磁力架上放置1 min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。加入200 mL的清洗缓冲液，吹吸混匀，置于磁力架上1 min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
8.加入50 mL RNase-Free ddH2O重悬磁珠，执行以下程序(置于PCR仪中，启用热盖99-105℃均可):
温度    时间
65℃    2 min
20℃    5 min
4℃    ∞
9.向步骤6反应液中加入50 mL裂解/结合缓冲液，反复吹吸混匀，20℃放置5 min。
10.将步骤7的反应液置于磁力架上，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
11.加入200 mL的清洗缓冲液，吹吸混匀，置于磁力架上1 min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
12.将样品从磁力架上取出，加入6-15 mL RNase-Free ddH2O，用移液器吹打混匀，室温放置2min。洗脱体积可根据需求自行调整，尽量充分洗脱产物。
13.置于磁力架上放置2min，待溶液澄清后，小心吸取上清至新的RNase-Free PCR管。
14.洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用，也可在-20℃保存过夜或在-80℃保存一个月。

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