CAT#:JW-11-230166
低温运输，-20℃保存

核糖核酸酶 R，20U/uL

产品及特点
RNase R（Ribonuclease R）是一种来源于大肠杆菌的Mg2+依赖的3'→5'核糖核酸外切酶，常用于消化除去线性RNA，以获得环状RNA （也称环形RNA）、内含子套索（Intron lariat）等非线性RNA。RNase R为环状RNA的研究提供了极大的便利，也可以给研究RNA剪接（RNA splicing）带来很大的便利。套索RNA是在pre-mRNA的剪接内含子过程中产生的，经RNase R消化，可以从总RNA中被分离出来而用于后续研究。本产品具有如下特点：
1.操作简单，用户只需准备待消化的RNA溶液即可。
2.能消化线性RNA （Linear RNA），但不能消化环状RNA （Circular RNA）、套索RNA （Lariat RNA）。
3.RNase R由大肠杆菌表达，表达基因为E.coli RNase R基因。
4.不含DNase，不含其它RNA内切酶和外切酶活性。
5.70℃加热10分钟可使RNase R失活。
6.获得的环状RNA可直接用于后续研究。
7.本产品仅供科研使用。

规格及成分
成份                                           编号          规格           包装
RNase R, 20U/uL                11-230166a    25 uL      0.5mL蓝盖管
10×RNase R反应缓冲液     11-230166b    0.5 mL    0.5mL红盖管
使用手册                            11-230166sc    1份           无
本试剂盒采用五孔盒包装

运输及保存   
低温运输，-20℃保存，有效期为12个月。

自备试剂
待消化的RNA，DEPC水

使用方法
一、RNase R的消化反应。
1.依次按下表在冰上配制如下反应体系：（注意：RNase R的用量和反应体系的体积需要根据具体情况，通过实验进行摸索调整，下表是建议用量。）
试剂                                                体积
RNA                                    <5 ug                >5 ug
10×RNase R反应缓冲液    2 uL                    5uL
RNase R, 20U/uL              1-3uL/ug RNA     1-3uL/ug RNA
DEPC水                             补至20 uL            补至50 uL
2.混匀并在37℃下孵育20分钟（10-30分钟），70℃灭活10分钟。

二、RNase R消化反应后，反应体系中环状RNA等的纯化回收（非必需程序，试剂自备）。
3.苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化回收环状RNA等。
（1）加入无核酸酶水将反应体积放大到180uL，再加入20 uL3M醋酸钠（pH5.2）或20uL 5M醋酸铵，充分混匀。加入等体积的苯酚/氯仿混合液（1:1）抽提一次剧烈震荡 20-30s，随后12000rpm离心5-10分钟取上清。
（2）加入双倍体积的无水乙醇沉淀RNA，在-20℃下至少孵育30分钟。随后12000rpm 4℃离心5-10分钟沉淀RNA。
（3）弃上清，用约500ul预冷的70%乙醇洗涤沉淀，以充分去除盐分。
（4）用DEPC水 重悬并溶解RNA，在-80℃储存。
4.使用RNA纯化柱或RNA纯化磁珠进行纯化回收。经过RNase R消化后的产物可以在70oC孵育10 min使酶失活后，通常无需进行纯化，就可以直接进行反转录，用于后续的RT-PCR、qPCR等。

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