CAT#:JW-11-230373
低温运输，2-8℃保存

PicoGreen超敏dsDNA定量试剂盒

产品及特点
对dsDNA进行准确定量是很多重要的分子生物学实验的前提。由于不同的方法有不同的线性范围和检测灵敏度，因此不同方法的适用样本也不同。其中， PicoGreen和SYBR Green I染料法适用于浓度在25pg/mL以上的DNA样品。灵敏度最高。之所以如此是因为它们除了嵌入到DNA的碱基对之间外，还有2个（对SYBR Green I）或3个（对PicoGreen）带正电的基团跟带负电的dsDNA磷酸基团通过静电结合。其示意图如下（图中PG表示PicoGreen，SG表示SYBR Green I）：

本产品根据PicoGreen定量原理开发，它具有下列特点：
1.即开即用，用户不需要单独摸索最佳条件。
2.操作简单，只需要将PG工作液与待测 dsDNA 样品混合即可。
3.所用PG染料对dsDNA具有高度选择性，对单链DNA和RNA几乎无反应。
4.线性范围在10ng/mL-10ug/mL（相当于10pg/uL-10ng/uL）。
5.本试剂需要使用Qubit荧光仪或类似荧光仪，也可以用荧光酶标仪替代。
6.能抗一定浓度的残留蛋白质、去污剂和盐类等干扰，详见附表。
7.本产品足够100次100uL体系的测定，每次用10uL样品。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用小扁盒包装
成分                                               编号        规格       包装
PG法dsDNA定量阴性对照    11-230373a    1 mL    1.5mL白盖管
PG法dsDNA定量阳性对照    11-230373b    1 mL    1.5mL黄盖管
PicoGreen工作液                  11-230373c    30 mL    30mL棕塑瓶
使用手册                               11-230373sc    1份            无

运输及保存
低温运输，2-8℃保存，有效期半年。

自备试剂
Qubit荧光仪或类似荧光仪

使用方法
一、反应设置
1.如果有N个样本，则标记N+2个0.5mL PCR薄壁管（需要跟所用荧光仪兼容），其中N个管用于N个样本，另外两个一个标为NC，用于阴性对照。一个标为PC，用于阳性对照。注意：不要标注在管壁以免干扰荧光采集。
2.在N个样品管中，分别加入跟编号对应的10uL样本。如果只想用5uL样本测试，可以用超纯水补到10uL。
3.在NC管和PC管中分别加入10uL本试剂盒提供的NC和PC。
4.然后每管中加入190uL本试剂盒提供的PicoGreen工作液。
5.涡旋震荡3秒，避免气泡产生，室温避光放置3分钟。
6.立即用Qubit系列或类似的荧光仪进行测定。如果暂时不测，上步的反应液可以放置3小时而荧光信号不会降低。

二、用Qubit 2测定荧光
7.在仪器操作界面，选择DNA模板，选择检测类型为dsDNA High Sensitivity。
8.选择Read Standard进入标准品测定模式。
9.先将NC反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出NC反应管。
10.再将PC反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出PC反应管。
11.选择Run Samples进入样本测定模式。
12.先将1号反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出1号反应管。
13.再将2号反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出2号反应管。
14.以此类推，直到将N个反应管测完。
15.按Qubit 2手册分析数据。

三、或用Qubit 3测定荧光
16.同第7-第10步。
17.选择Run Samples进入样本测定模式。
18.在旋转轮面板上选择所用测试样本的体积10uL。
19.在下拉菜单中选择汇报结果所用的浓度单位。
20.先将1号反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出1号反应管。
21.再将2号反应管插入仪器的样品槽，关上盖子，按Read Standard读取数据，结束后移出2号反应管。
22.以此类推，直到将N个反应管测完。
23.按Qubit 3手册分析数据。
四、或用Qubit 3其他荧光仪测定荧光
24.按相关仪器手册进行操作。激发波长需要选择480nm，发射波长选择530nm。
技术资料
本检测所能耐受的常见污染物的残留浓度（指在所用10uL样本中的浓度）
类别                   成分                                残留浓度
盐类            乙酸铵、乙酸钠、氯化钠       200mM
                   氯化镁                                    40mM
有机溶剂    乙醇                                         20%
                   氯仿                                        4%
                   苯酚                                         2%
去污剂        Sarcosyl                                   2%
                   SDS                                         0.2%
                   Triton X-100                            0.02%
                   CTAB                                      0.001%
其他            RNA                                 跟待测DNA等浓度
                   聚乙二醇                                20%
                   琼脂糖                                     2%
                   BSA                                        400ug/mL
                   dNTP                                      2mM

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