CAT#:JW-7-EC240113
常温运输及保存，有低温成分

木瓜样蛋白酶活性测定试剂盒（荧光法）

产品及特点
本产品是使用荧光光度法检测SARS-CoV-2病毒木瓜样蛋白酶活性的检测试剂盒。SARS-CoV-2病毒的nsp3基因编码木瓜样蛋白酶（Papain-like protease，PLpro），该酶催化病毒多蛋白链水解产生复制酶，也催化蛋白的脱泛素反应，还跟其它脱泛素酶一样，能酶切LXGG多肽序列。由于SARS-CoV-2的PLpro在病毒成熟和致病机制中有重要作用，是重要的药物开发靶点，因此快速检测其酶活具有重要的意义，为此本公司开发了基于荧光光度法的PLpro活性检测试剂盒。本产品具有如下特点：
1.使用便捷，用户只需准备待测样本。
2.产品经过优化，节约用户自行优化的时间。
3.操作简单快捷，整个实验可以在1小时内完成。
4.本产品足够100次PLpro活性测定实验。
5.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份                                       编号             规格           包装
PLpro底物干粉               7-EC240113a    100次    1.5 mL棕色管
PLpro底物稀释液            7-EC240113b    5 mL     5 mL本色瓶
PLpro阳性标准品干粉     7-EC240113c    100次    1.5 mL本色管
PLpro稀释液                    7-EC240113d    100次    0.5 mL绿色管
使用手册                        7-EC240113sc    1份            无
本产品采用小扁盒包装

运输及保存
常温运输及保存，PLpro底物干粉和PLpro阳性标准品干粉需要-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
待测样品，超纯水，比色皿，Ex=490nm/Em=520nm的荧光光度计。

使用方法
1.首次使用本试剂盒时，需要配制PLpro底物工作液和PLpro阳性标准品溶液。
配制PLpro底物工作液：将5mL PLpro底物稀释液加入到装有PLpro底物干粉的瓶中，摇晃混匀得到PLpro底物工作液。根据每次用量分装（如果每次要做10个样本测试，则按0.5mL/管分装）-20ºC保存，每次取用。
配制PLpro阳性标准品溶液：将0.5mL PLpro稀释液加入到装有PLpro干粉的瓶中，摇晃混匀得到PLpro工作液。没用完的需要放-20ºC保存
2.用实验变量处理细胞得到待测样本，或者直接将实验变量（如酶抑制剂）加入到待测样本中，然后将待测样本用PLpro稀释液稀释成适当浓度，如果不知道稀释度范围，需要先做预实验确定。
3.在常温下按下表设置反应。如果有N个样本，则需要设置N+2个反应，反应总体系为100 μL：
步骤                       空白对照    N个样品    阳性对照
PLpro底物工作液    50 μL           各50 μL    50 μL
PLpro底物稀释液    50 μL            -    
处理后的待测样本    -               各50 μL    
PLpro阳性标准品     -                -                   50 μL
4.放入荧光光度计进行测定（激发波长选择490 nm、发射波长选择520nm处）。如果用于动力学分析，则每5分钟读取一次各孔吸光度值（A），读取30-60分钟。如果用于终点法分析，则37℃保温30-60分钟。
5.数据分析前，将所有样本的荧光值RFU减去空白对照的RFU，得到有效RFU值。
6.动力学分析：用每个样本的RFU针对时间作图，确定线性区（一般在反应最初的10分钟以内），然后计算反应速度（RFU/分钟）。比较各样本之间的速度即可评估各种实验变量对该酶的影响。
7.终点分析：用每个样本的RFU针对实验变量作图即可评估各种因素对该酶的影响。

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