CAT#:JW-7-01034
低温运输和保存

过氧化氢酶活性测定试剂盒（分光光度法：240 nm）

产品及特点
过氧化氢酶（Catalase，CAT，EC1.11.1.6）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。因此检测过氧化氢酶的活性具有重要的意义，本试剂盒的原理是H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。本产品基于上述原理开发，它的特点如下：
1.即开即用，用户不用单独准备各种试剂。
2.操作简单，加入样品到3 mL比色皿中之后直接进行5分钟即可。
3.适用于动植物、微生物和培养细胞样品。
4.本试剂盒足够100次测定，每次可以测定0.2mL PME初提液。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用小扁盒包装
成份                                编号            规格        包装
CAT活性测定提取液    7-01034a    120mL    120 mL本色瓶
CAT活性测定工作液    7-01034b    120mL    120 mL本色瓶
使用手册                    7-01034sc    1份           无

运输及保存
低温运输，2-8℃保存，有效期一年。

自备物品
超纯水、荧光分光光度计，2-3mL比色皿、待测样本

使用方法
一、粗酶液提取:
1.细菌、细胞或组织样品的制备:
1）细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：CAT活性测定提取液体积（mL）为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CAT活性测定），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2）组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1 mLCAT活性测定提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤（正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定）
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至240nm处，蒸馏水调零。
2.测定前将CAT检测工作液37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min。
3.在1mL石英比色皿中加入35 uL样本和1 mL CAT活性测定工作液，混匀，室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2

三、CAT活性计算：
1.血清（浆）CAT活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=678×ΔA
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:
1）按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V样×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
2）按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT（nmol/min/g鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W×V样÷V样总）÷T=678×ΔA÷W
3）按细菌或细胞密度计算:
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。CAT（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=1.356×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.035×10-3 L；ε:H2O2摩尔消光系数，4.36×104 L/mol/cm；d:比色皿光径，1cm;V样：加入样本体积，0.035 mL;V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W:样本质量，g;Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL;500:细胞或细菌总数，500万。

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