CAT#:JW-981101
常温运输及保存

昆虫DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下，特异地跟基因组DNA结合形成沉淀，然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到DNA。本产品具有下列特点：
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物，包括昆虫、节肢动物、蛔虫和扁形虫等。
2.除新鲜样品外，还适合于各种保存状态的样品，包括冷冻的样品、用乙醇保存的样品和福尔马林保存的样品。
3.提取到的基因组DNA完整性，长度一般在20-50 Kb。
4.DNA纯净，OD260/280一般都在1.8左右，可直接用于PCR、酶切和杂交等。
5.操作简单，整个过程约30分钟。
6.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
7.本产品足够50次微量提取，每次可以处理0.1-0.3 g昆虫样品。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大纸盒包装
成分                                    编号            规格        包装材料
昆虫DNA纯化试剂溶液A    981101a    50 mL    60 mL本色瓶
昆虫DNA纯化试剂溶液B    981101b    50 mL    60 mL本色瓶
昆虫DNA纯化试剂溶液C    981101c    50 mL    60 mL本色瓶
离心吸附柱                        220144       50套        塑料袋
通用洗柱液                        220143       50 mL       60 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                            981101sc        1份        1份

运输及保存
常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.称取0.1-0.3 g昆虫样品转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL塑料离心管中。
注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA会吸附在表面，影响得率。
2.在离心管中加入1 mL 65℃预热的昆虫DNA纯化试剂溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果昆虫DNA纯化试剂溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3.65℃保温5-30分钟，其间最好吹打混匀2-3次。
4.12,000-15,000×g室温离心3分钟。
5.将不超过0.75 mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的昆虫DNA纯化试剂溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊。
7.将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8.12,000-15,000×g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5 mL塑料离心管中。
9.加入0.2mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
10.12,000-15,000×g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5 mL塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5倍体积的昆虫DNA纯化试剂溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11.加入1.5倍体积的昆虫DNA纯化试剂溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12.每次转移0.7-0.8 mL混合液后，室温放置5-10分钟。
13.12,000-15,000×g室温1分钟，弃穿透液。
14.对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14步的操作。
15.将0.7 mL通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3 mL的通用洗柱液，12,000-15,000×g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17.空甩1分钟去除残留液体。
18.将离心柱放置在一新的1.5 mL塑料离心管中，加入30-100 μL DNA洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为昆虫DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20.可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。

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