CAT#:JW-990605-5
低温运输，-20℃保存

DNA探针地高辛标记试剂盒（TdT加尾法）

原理及特点
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA 的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：

本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3’突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛标记的核苷酸等）。
4.提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种选择。
5.同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6.标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度RNA检测）、小RNA Northern、Southern Blot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                                       编号    规格        包装材料
TdT缓冲液，5×                               990605a    20 uL    0.5mL绿盖管
TdT末端转移酶（10 U/uL）            990605b    10 uL    0.5mL红盖管
dATP，2 mM                                    220314c    5 uL    0.5mL黄盖管
地高辛-11-dUTP（DIG-11-dUTP）    990605    5 uL    0.5mL本色管
超纯水                                                210806    1 mL    1.5mL蓝盖管
使用手册                                         990605sc    1份        无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年

自备试剂
DNA模板

使用方法
1.在0.2 mL微量离心管中按下表设置一个20 uL体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度）：
成份                        用量
自备DNA模板        100-200 pmol
TdT Buffer，5×        4 uL
DIG-11-dUTP        1 uL
dATP，2 mM        1uL或不加
TdT末端转移酶（10 U/uL）    2 uL
超纯水                   补到20 uL
注: dATP可以不加，这样得到的加尾全部是标记核苷酸，但由于DIG或biotin的空间阻碍，这种探针的灵敏度并不是最佳。如果在加尾反应时掺入一定比例的dATP，控制标记核苷酸的密度不至于太高，这样反而可以提高探针的比活。标记核苷酸和非标记的dATP的具体比例为多少，可以自己优化。一般可以选择1：2。
2.37℃反应30分钟。如果没有非标记核苷酸存在，一般只能加尾3-5个标记的核苷酸（因为标记基团通过空间阻碍抑制延长反应）；如果在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP（其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸。
3.70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4.如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的DNA探针的泳动速度将低于没标记的DNA分子。
5.如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6.使用时需将探针以1-8 ng/uL的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。

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