CAT#:JW-981205-30
常温运输和保存
但上样液需-20℃保存

Tricine-SDS-PAGE电泳试剂盒

产品及特点
Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，同时其蛋白回收率低，跟后续质谱分析不兼容，为此本公司在传统Tricine-SDS-PAGE电泳的基础所，进行了改良很升级，并推出本产品。它具有下列特点:
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2.安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
3.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
4.分辨率高，只需要两层胶（浓缩胶和分离胶）就可以达到过去三层胶的效果（浓缩胶、隔离胶和分离胶）。
5.蛋白片段的回收率比常规Tricine-SDS-PAGE高。
6.纯化的蛋白可以用于后续的质谱分析。
7.本产品可配30块14cm×14cm×0.75mm的mini胶
8.本试剂盒只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成分                                                            编号      规格           包装
丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺干粉(29:1)    290716        60g             250 mL棕塑瓶
Tricine-SDS-PAGE
配胶液                                                981205b       250 mL        250 mL本色瓶
TEMED                                        CAS:110-18-9    1.5 mL          1.5 mL棕色管
过硫酸铵                                    CAS:7727-54-0    1 g               1.5 mL本色管
Tricine-SDS-PAGE
上样缓冲液，2×                                     81205c    1 mL               1.5 mL棕色管
Tricine-SDS-PAGE
电泳液干粉                                            81205d    约80g            250 mL本色瓶
使用手册                                            981205sc    1份                    无

运输及保存
常温运输和保存（上样液需要-20℃保存），保存期为一年。

自备试剂
Milli-Q纯水或同等级别的去离子水、水饱和的异丁醇

操作流程
以下操作以配制由4%浓缩胶和10%分离胶的体系为例子说明配制胶的流程。如果用户需要调整胶的浓度，请按比例修改。
1.配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29：1）(丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液简称AB溶液，下同)：直接在装有60克丙烯酰胺和3克甲叉双丙烯酰胺的瓶中加入140 mL自备的去离子水，拧紧瓶盖后37℃水浴，其间颠倒摇晃多次，直到干粉全部溶解，得到30% AB溶液（99：1），该溶液最好4℃避光保存，在一个月内用完。AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
2.配制3%的APS（过硫酸铵）：按每30mg过硫酸铵干粉加1 mL去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的1.5 mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。此溶液必须现配现用。过硫酸铵极其容易吸潮，没用完的过硫酸铵一定要拧紧盖子。如果吸潮，可用自备的分析纯过硫酸铵替代。
3.配制10×Tricine-SDS-PAGE电泳液：在烧杯中加入约800mL去离子水，然后加入本试剂盒提供的约80g Tricine-SDS-PAGE电泳液干粉，65℃加热搅拌溶解，用去离子水定容到1000mL。每次使用时用去离子水稀释10倍即得1×Tricine-SDS-PAGE电泳液。
4.配制30 mL 10%分离胶（足够灌两块0.75 mm×14 cm×14 cm胶）。
A)标记1个50 mL的三角瓶，按下表的用量加入各成分：
成份                                        用量
30%AB溶液（29：1）           10 mL
Tricine-SDS-PAGE配胶液    16.8 mL
离子水                                    2.7 mL
B)混匀后真空脱气10-15分钟。
C)灌分离胶：在分离胶瓶中加入450 mL 3%的APS溶液和18 mL TEMED溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将分离胶溶液沿着一个隔条的边缘加到玻璃板夹层中，直到溶液的高度距离玻璃上沿还有1 cm。
D)盖1cm高的自备水饱和的异丁醇或70%乙醇使胶面跟氧气隔绝（氧气会抑制胶的凝固）。让分离胶在室温聚合30-45分钟。
5.配制10 mL 4%浓缩胶（足够灌两块0.75 mm×14 cm×14 cm胶）。
A)在一个50 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：
成份                                       用量
30%AB溶液（29：1）         1.32 mL
Tricine-SDS-PAGE配胶液    1.52 mL
离子水                                   6.85 mL
B)混匀后真空脱气10-15 min。
C)将300 uL新鲜配制的3%的过硫酸铵溶液和10 uL TEMED溶液加入到溶液中，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧隔条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到夹层中的溶液离玻璃板顶部约1cm高为止。
D)插入0.75 mm厚的塑料梳子，再补加浓缩胶溶液填满梳子间的空隙。注意避免产生气泡。让浓缩胶在室温聚合30-45分钟。
6.小心拔出塑料梳子，在上层和下层缓冲槽中加入1×Tricine-SDS-PAGE电泳液，并用其冲洗加样孔，去除没有凝聚的丙烯酰胺溶液。注：本产品提供10 升的电泳液干粉，将所有干粉溶解在600-800 mL去离子水中，最后定容到1000 mL即得10×电泳液，可以室温放置，不需要灭菌，用时再用去离子水稀释10倍成1×电泳液。
7.在密封的螺盖微量离心管中，用2×Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液按1：1的比例稀释蛋白样品，于0℃加热10分钟。注意：如果样品是蛋白沉淀物，则加入100 mL新稀释得到的1×Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液溶解；如果样品是蛋白稀溶液，蛋白浓度过低，可先浓缩蛋白质再溶解。与Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液混合后的样品如未经70℃加热灭活蛋白酶，切勿放于室温。
8.上样。如果后续用考马斯亮蓝染色，对于成分复杂的蛋白质样品，上样量最好为20 uL（含25-50 mg总蛋白质）；对于只有一种或几种蛋白质的样品，上样量最好为1-10 mL。如果用银染，上样量可减少10-100倍。
9.电泳。125-150 V恒压电泳直到电泳指示剂到达胶板的边缘。一般需要4-5 h。注：本产品的Tricine-SDS-PAGE上样液使用了考马斯亮蓝G-250作为指示剂，其泳动速度比最小的肽还快。
10.终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理（最好用银染染色，节约样品）。注意：考染或银染时，基本步骤同蛋白PAGE胶染色，只是任何一步（尤其是固定步骤）的处理时间都不要超过20分钟，否则多肽非常容易扩散出PAGE胶而降低检测的灵敏度。

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