CAT#:JW-991102-50
常温运输和保存

骨骼DNA提取试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是专门用于从动物骨骼（包括骨粉）样品中提取DNA的产品，它具有下列特点：
1.微量提取，一次可以处理300 mg左右的骨骼（但需要先将骨骼变成骨粉）。
2.柱式操作，方法简单，整个过程只需要40-60分钟。
3.得到的DNA分子量不均匀，一般在20 Kb到100 bp之间，具体取决于骨骼的新鲜程度，骨粉的加工方法等。
4.得到的DNA可以直接用于PCR或荧光PCR反应。
5.本产品足够20 mL体系的50次微量提取。
6.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份                          编号        规格        包装
骨骼DNA溶液A      991102a    50 mL    60 mL本色瓶
骨骼DNA溶液B      991102b    25 mL    30 mL棕色玻璃瓶
骨骼DNA溶液C      991102c    30 mL    30 mL本色瓶
离心吸附柱             220144      50套       塑料袋
通用洗柱液             220143      50 mL    60 mL本色瓶
DNA洗脱液2.0        220125    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册              991102sc    1份            无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿

使用方法
1.骨粉的制备：用自备酒精将骨骼表面擦洗干净，以防污染物对后续PCR的影响，然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。对于已经制备好的、商品化的骨粉，可以跳过此步，直接进入下一步。
2.用天平称取0.2克骨粉，转移到2 mL塑料离心管中。
3.加入1 mL溶液A到骨粉中，充分振荡30秒混匀。（注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用，且骨粉加到溶液A中后会特别黏稠，需使劲振荡混匀。）
4.65℃水浴放置30分钟。
5.加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL的自备氯仿，充分振荡30秒混匀。
6.12,000 rpm室温离心3分钟，小心将上清液转移到一个新的塑料离心管中。
7.加入0.5 mL溶液C，颠倒混匀。
8.将混合液分两次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要12,000 rpm室温离心1分钟，并弃收集管中的穿透液。
9.加入0.5 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
10.再加入0.5 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
11.12,000 rpm室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的液体会抑制后续的PCR。
12.将离心吸附柱套入到一个自备的干净的1.5 mL塑料离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30 mL DNA洗脱液，然后室温放置2分钟。如果先将DNA洗脱液预热到60-80℃再使用，效果更佳。
13.12,000-15,000 g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为骨骼DNA。
14.取少量进行电泳检测。注意：一般DNA都呈现弥散状，分布在20 Kb到100 bp这一广泛的范围，其比例跟骨骼（或骨粉）的新鲜程度、加工过程（对骨粉）等因素密切相关。
15.DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。

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