CAT#:JW-980804
常温运输及保存

真菌RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门用于真菌RNA的纯化，它具有下列特点：
1.柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2.RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、 Northern杂交、microarray hybridization、 cDNA 合成等实验。
3.RNA产量高，一般在 20-70 μg/mL 酵母培养物(约 2E7个细胞)。
4.非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌，包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Pichia pastoris等。
5.本产品足够50次微量纯化实验。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成 份                                编 号        规 格        包装材料
真菌RNA纯化溶液 A    980804a    20 mL    30 mL本色瓶
真菌RNA纯化溶液 B    980804b    25 mL    30 mL棕色玻璃瓶
真菌RNA纯化溶液 C    980804c    75 mL    125 mL本色瓶
真菌RNA纯化溶液 D    980804d    25 mL    30 mL本色瓶
离心吸附柱                    220144    50 套        塑料袋
通用洗柱液                    220143    50 mL    60 mL本色瓶
RNA 洗脱液                   971207    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                    980804sc    1 份       1 份

运输及保存
常温运输和保存， 有效期一年。

自备试剂
氯仿

使用方法
1.将50 mg左右的干菌丝(或100 mg左右的鲜菌丝、适当数量的真菌菌落)转移到1.5 mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10 mL液体真菌在1.5 mL塑料离心管中12,000-15,000×g离心1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2.加入0.4 mL真菌RNA纯化溶液A并充分吹打混匀。如果真菌RNA纯化溶液A存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3.加入0.4 mL 溶液B，剧烈振荡30秒。
4.65℃保温 5 分钟。
5.室温12,000-15,000×g离心3-5分钟，转移上清到一干净的1.5 mL塑料离心管中。
6.再加入0.1 mL真菌RNA纯化溶液B和0.1 mL自备氯仿，振荡混匀30秒。
7.室温12,000-15,000×g离心3-5分钟，转移上清到一自备的、干净的5 mL塑料离心管中。
8.加入相当于上清 3 倍体积的真菌RNA纯化溶液C（约1.2-1.5 mL）和1倍体积的溶液D（约 0.4-0.5 mL），充分混匀。
9.将混合液（约2.5 mL）分3-4次转移到离心吸附柱中。每次13,000-15,000×g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10.用0.5 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.5 mL通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
13.将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5 mL塑料离心管中，加入30-100 μL RNA洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15.RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳。
16.RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH 7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL）， 进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/真菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。
17.RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用多糖清除剂去除。测OD时RNA不能过度稀释使OD读数低于仪器的有效范围，如果低于一起的检测范围，该读数无效。

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