CAT#:JW-981104-1000
常温运输和保存

核酸PAGE胶银染试剂盒

产品及特点
核酸银染的原理是银离子(Ag+）可与核酸（DNA和RNA）形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使 Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。本产品就是根据此原理开发，它具有下列特点：
1.既可用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的核酸染色，也用于琼脂糖凝胶染色。
2.既可检测DNA，也可以检测RNA。既可检测单链也可以检测双链。最短可以10几个碱基。
3.其灵敏度比EB高200倍，能检测到10ng的DNA条带。
4.可用于检测SSR标记、SNP标记。
5.比常规的银染方法快捷，只有染色和显影两步，只需要20分钟。
6.本产品足够配制1000mL的工作液，足够10次银染。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用小扁盒（无垫）包装
成份                                    编号        规格        包装材料
溶液A成分一（干粉）    981104a1    2 克           10 mL棕色塑料瓶
溶液A成分二，10×         981104a2    100 mL    120 mL本色瓶
溶液A成分三，10×         981104a3    100 mL    120 mL本色瓶
溶液B成分一，10×         981104b1    100 mL    120 mL本色瓶
溶液B成分二                   981104b2    5 mL           5 mL本色瓶
使用手册                         981104sc    1 份                    无

运输及保存
常温运输和保存，保存期限为一年。

自备试剂
去离子水。

使用方法
一、配制溶液A（即染色液）100 mL
注意：溶液A需要新鲜配制，不能存放。所需溶液 A（染色液）的体积跟PAGE胶的面积大小相关，一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20-30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液A。如果配制的溶液A的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。
1.在一干净烧杯中加入下列成分，充分搅拌混匀即可。
成分                    用量
自备去离子水    80 mL
溶液A成分一    0.2 g
溶液A成分二    10 mL
溶液A组分三    10mL

二：配制溶液 B 100 mL
需要配制的溶液B（显色液）的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20-30mL溶液B。下面的用量是针对配制100mL溶液B。如果配制的溶液B的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。
2.在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液 B 需要新鲜配制。
成分                    用量
自备去离子水    89.5 mL
溶液B成分一    10 mL
溶液B组分二    0.5 mL

三：染色
3.PAGE电泳结束后，将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中，漂洗2次，每次 2分钟。
4.将PAGE胶转移到适当体积的溶液A，使溶液A在轻柔摇晃过程中能够淹没 PAGE胶。室温染色时间10分钟。
5.倒掉溶液A，用去离子水快速漂洗2次，每次半分钟。
6.将PAGE胶转移到适当体积的溶液B，使溶液B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE 胶。室温摇晃直到颜色显现，一般需要10分钟左右。
7.将PAGE胶置于适当背景下照相。

技术资料
核酸和蛋白质银染注意事项
1.银染主要出现在PAGE胶的表面，故用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2.对于已经用考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考马斯亮蓝染色中使用的乙酸会干扰银染，因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
3.不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4.PAGE凝胶银染后背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1μS的去离子水。
5.如果染色后有烟雾状灰色或烟雾状棕色沉淀出现在凝胶表面，可能是在漂洗不彻底，或是染色过程时温度太低。
6.较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
7.PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质都会干扰银染，需要增加固定步骤，固定的目的就是去除这些物质。
8.室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
9.SDS-PAGE凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条带。减少巯基乙醇的用量即可避免。
10.凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
11.染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
12.银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
13.银染器皿也非常重要。最好是玻璃平皿，因为其化学性质极其稳定，几乎不与银染试剂中的任何成分发生反应，且不具有吸附染料的特性。其次是医用搪瓷盘，瓷釉为无机玻璃质材料，能耐各种浓度的无机酸(包括强氧化性酸)、有机酸、弱碱和强有机溶剂，但不耐酸、碱介质交替使用，而常规银染法就是酸碱介质交替使用，因此搪瓷盘银染效果不如玻璃平皿。塑料种类较多，如果塑料是由含氨基官能团的有机物（脲、三聚氰胺或苯代三聚氰胺）与醛类（主要是甲醛）化合物经缩聚反应而得，则这种塑料会在碱性溶液中与有强还原作用的甲醛发生反应，进而使甲醛消耗，减弱银离子与蛋白的结合，降低显色敏感度和显色速度。

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