CAT#:JW-911201-50
常温运输和保存

痰液DNA提取试剂盒

产品及特点
痰液是重要的临床样品，可以用于诊断肺癌，肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯化DNA十分棘手，为此本公司开发了本产品，专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化DNA，用于后续的分子生物学分析。本产品具有下列特点：
1.每次可以处理10-20 mL痰液，得到2-5 ug DNA。
2.纯度高,可直接用于后续得PCR检测。
3.一管式操作，减少污染，节约成本。
4.含痰液细胞固定液（溶液A），便于取样和运输。
5.无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成   份                                       编号          规格           包装
溶液A（痰液细胞固定液）    911201a    250mL×2    250mL棕色瓶
溶液B（痰液解稠剂）           911201b    250mL×2    250mL本色瓶
溶液C                                    911201c    30 mL         30mL本色瓶
使用手册                              911201sc    1份                无

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
异丙醇，70%乙醇。

使用方法
一：痰标本的获取与保存（注意：痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌，需按传染源相关规定流程进行操作）
1.每例患者在常规痰标本采样时，最好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个50 mL的痰液收集管内新鲜加入10 mL溶液A和10 mL溶液B，待患者晨起漱口后，咳深部痰7～8口（约10-20mL），收集到装有溶液A和溶液B混合液的痰液管收集内，混匀后储于4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室，4℃冰箱保存直到使用。
2.使用时，在室温反复振摇装有样品（总体积约30-40 mL）的痰液收集管5～10分钟，充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。
3.4℃2500g离心5分钟，弃上清。
4.沉淀再用自备的PBS液洗两遍。
5.所得沉淀可以直接用于涂片，用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在0.2mL PBS缓冲液中重悬后转入1.5 mL螺旋盖塑料离心管，-20℃冰箱长期保存，或立即用于下步的DNA提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境，建议不要使用压盖式塑料离心管。同时最好设置一个阳性和一个阴性对照。

二：DNA提取
6.在上步所得的0.2 mL样品中加入0.6 mL溶液C。溶液C容易形成沉淀，用前需37℃加热融化并摇晃均匀。
7.室温放置10分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
8.振荡数秒后加入0.7 mL自备的异丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀。
9.把离心管的向心面对向转头，13,000-15,000 g室温离心至少15分钟。
10.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀（此时可能看不见）。
11.加入1.0 mL 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g室温离心5分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
12.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀（此时呈膜状沉淀）。
13.将离心管放回离心机再短暂离心数秒, 然后用移液器移弃约50 uL残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。
14.加入200 μl RNase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA沉淀，溶液将呈混浊状，含少量不溶，短暂离心后存上清（含DNA）。
15.直接取适量用于PCR，样品使用量不超过PCR体系的1/2。剩余DNA样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

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