CAT#:JW-901201-20
常温运输和保存

酵母电转感受态细胞制备试剂盒

产品及特点
本产品是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。它具有下列特点：
1.操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2.制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3.主要用于酿酒酵母和粟酒裂殖酵母，但能否用于其他酵母不详。
4.最高转化效率可达到0.2-1×10E6个转化子/μg质粒DNA。
5.得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7.本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

规格及成分
成分                                                       编号               规格           包装
酵母电转感受态细胞制备试剂A            901201        100mL    120mL本色瓶
使用手册                                            901201-20sc    1份            无
本产品采用塑料袋包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
灭菌水、SD液体培养基（不含氨基酸的0.67%Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖）、SD固体培养基（在SD液体培养基中再加2%琼脂）、YPD液体培养基（1%Bacto Yeast Extract，2%Bacto Peptone,2%葡萄糖）、YPD固体培养基（在YPD液体培养基中再加2%琼脂）

使用方法
一：电感受态细胞的制备
说明：按本方法制备1管酵母电转感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养粟酒裂殖酵母细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，
直到OD600达到1.0左右（相当于1×10E7细胞/mL）。
2.培养酿酒酵母细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右（相当于1×10E7细胞/mL）。
3.冰上放置15分钟后室温1600rpm离心5min，弃上清。
4.用冰浴的灭菌水洗涤3次。
5.用0.2mL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A重悬细胞。
6.按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1.将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速
化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。
2.用1mL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A洗涤一次。
3.加入50μL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A重悬细胞。
4.加入1-30ng质粒DNA并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6.按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对
0.2cm的电击杯，则为2kV),5ms(25F,200)（各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作）。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8.取0.2mL转化细胞涂盘（粟酒裂殖酵母细胞需涂盘在SD固体培养基上，
酿酒酵母细胞需涂盘在YPD固体培养基上），30℃培养4-6天。

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