CAT#:JW-901109-50
常温运输和保存

粪便RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产品是在天恩泽基因粪便RNAout基础上开发的柱式粪便RNA提取产品，它具有下列特点：
1.操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2.去污染效果好，RNA纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3.得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
4.性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
5.试剂无毒无害,环保。

规格及成分
成份                                编号           规格           包装材料
粪便RNA纯化溶液A    901109a        50 mL    60mL本色瓶
粪便RNA纯化溶液B    901109b        15 mL    15mL棕色瓶
粪便RNA纯化溶液C    901109c        50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                    220144        50套        塑料袋
通用洗柱液                    220143        50 mL    60mL本色瓶
RNA洗脱液                   971207         10 mL    10mL本色瓶
使用手册                        901109sc    1份               无
本产品采用大扁盒包装

运输及保存
常温运输和保存，溶液B长期保存需要放4℃，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.称取0.5-1 g粪便放入到含液氮的研钵中，迅速将冻成固体的粪便研磨成粉末后。
2.将粉末转移到5-15mL的塑料离心管中（不能使用玻璃离心管），加入1 mL 65℃预热的粪便RNA纯化溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。
3.将匀浆物转移至干净的1.5mL塑料离心管中。
4.在离心管中加入0.3 mL的粪便RNA纯化溶液B（溶液B用前需要摇匀，呈浑浊状）和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温13000 g离心3分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
6.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。
7.加入等体积的粪便RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8.将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中，13000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9.将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中， 13000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12.将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13.13000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14.RNA完整性的电泳检测：由于粪便RNA含有肠道上皮细胞和肠道细菌的RNA，它们的分子量大小不一，所以电泳时不会形成清晰的条带。
15.RNA产量产率测定：通过OD260的光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/粪便的用量)。
16.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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