CAT#:JW-930828-20
低温运输，-20℃保存

DNA去磷酸化试剂盒

产品及特点
本产品是基于碱性磷酸酶的核酸去磷酸试剂盒。它具有下列特点：
1.可以去除DNA、RNA和dNTP的磷酸基团。
2.用于克隆载体去磷酸化时，可以有效防止载体自连。
3.可用于测序或SNP分析前除去PCR反应中dNTP 和焦磷酸盐。
4.T4 PNK 标记5´ DNA末端前，用来去除DNA靶分子的磷酸基团。
5.模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA；既可以是平末端，也可以是5′端突出或3′端突出的粘性末端。
6.在几乎所有限制性内切酶反应缓冲液中均有活性，故可以跟限制性内切酶酶切反应同步进行，减少操作步骤。
7.去磷酸化处理后的反应液不需要纯化，灭活酶后可直接用于后续的连接反应和标记反应。
8.65℃15分钟的热处理可以使酶不可逆地彻底灭活，不用担心残留的活性影响后续的实验。
9.本产品足够20次20μL体系的去磷酸化实验。
10.本产品仅供科研使用。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                编号        规格            包装
10×去磷酸化缓冲液     930828a    50 μL    0.5mL（蓝盖管）
细菌碱性磷酸酶           930828b    20 μL    0.5mL（紫盖管）
超纯水                         210806       1 mL    1mL（本色管）
使用手册                     930828sc    1份           无

运输及保存   
低温运输，-20℃保存，有效期为12个月。

自备试剂
DNA片段

使用方法
特别注意：
由于dNTP和ATP也是细菌碱性磷酸酶的底物，所以如果DNA溶液中含有大量的dNTP（比如PCR产物中）或ATP，而目的是去除DNA溶液的磷酸基团，最好先将其去除，否则它们会耗掉大量的细菌碱性磷酸酶活性，降低DNA去磷酸化效率。
一、去磷酸化反应（以纯化德DNA片段为例）
1、在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
成分                                用量
胶回收的DNA片段      1 pmol（相当于1ug 3Kb的线状质粒）
10×去磷酸缓冲液        2 μL
细菌碱性磷酸酶          0.5 μL
超纯水到                     20 μL
2、建议在37℃反应30分钟（对平末端、5′端突出或3′端突出的DNA片段均采用此保温条件）。
3、65℃反应15分钟变性细菌碱性磷酸酶。
4、DNA片段可以直接用于连接。

二、限制性酶切反应中的同步去磷酸化
5、本细菌碱性磷酸酶在几乎所有限制性内切酶的缓冲液中都有活性，故所以可以按1ug 3Kb 长度的DNA加1μL细菌碱性磷酸酶的比例（对应的是DNA末端数量）直接加到限制性内切酶的反应液中。反应液中最好不含dNTP和ATP。
6、加热灭活限制性内切酶和细菌碱性磷酸酶（灭活条件根据限制性内切酶不同而不同，但不能低于65℃，时间不能短于15分钟，否则不能灭活细菌碱性磷酸酶）。灭活后的样品可以直接用于后续实验。
7、如果不能采取加热灭活限制性内切酶和细菌碱性磷酸酶，则需酚/氯仿抽提去除酶。具体操作如下(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：

附：酚/氯仿抽提去除酶步骤：
1、在反应液中加入超纯水使体积变成100μL，以免纯化过程中DNA丢失。如果有必须，可以加入和4μL核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL酚/氯仿/异戊醇25：24：1混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、加0.1倍体积（即10μL）的3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2）。
4、再加入2.5倍体积（即250μL）的无水乙醇。
5、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
6、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
7、短暂离心5秒，吸弃残留液体（约30-50μL）。
8、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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