CAT#:JW-971202
常温运输和保存

昆虫RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品（尤其是昆虫样品）中提取总RNA的试剂。该产品特点如下：
1.操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2.RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30 μg总RNA。
4.得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

规格及成分
成份                                编号            规格       包装材料
昆虫RNA纯化溶液A    971202a       50 mL    60 mL本色瓶
昆虫RNA纯化溶液B    971202b      15 mL    15 mL棕玻瓶
昆虫RNA纯化溶液C    971202c       50 mL    60 mL本色瓶
离心吸附柱                   220144       50套            塑料袋
通用洗柱液                   220143       50 mL    60 mL本色瓶
RNA洗脱液                   971207      10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                       971202sc    1份            1份
本产品使用大扁盒包装

运输及保存
常温运输和保存，昆虫RNA纯化溶液B最好放4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.将50-300 mg昆虫组织放入10-15 mL塑料离心管中，加入1 mL昆虫RNA纯化溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1 mL昆虫RNA纯化溶液A。注意：溶解昆虫RNA纯化溶液A沉淀。昆虫RNA纯化溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2.将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中（可以不必转移非液体的细胞碎片）。
3.在离心管中加入0.3 mL的昆虫RNA纯化溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12,000 rmp离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5.将上清液（约0.6 mL）转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 μL上清液不取。
6.加入等体积的昆虫RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。
7.将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9.加0.7 mL通用洗柱液，室温12,000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10.加0.3 mL通用洗柱液，室温12,000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12,000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12.将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13.12,000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14.RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现（文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7）
15.RNA产量产率测定：将5-10 μLRNA溶于TE缓冲液中（pH 7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。
16.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

技术资料
昆虫rRNA分类示意图

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