CAT#:JW-960602-50  
常温运输和保存

植物DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是柱式植物基因组DNA提取产品，可以用于多种植物基因组DNA（含叶绿体和线粒体DNA）的快速提取。本产品具有下列特点：
1.纯度高，不含污染和抑制剂，可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、 multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验。
2.产率一般在3-30 ug/100 mg样品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
3.适用范围广，可以使用于绝大多数植物的各种组织。
4.不会发生离心柱堵塞现象。
5.本产品足够50次微量提取。

规格及成分
成份                                                   编号        规格            包装
植物DNA纯化溶液A                        960602a    40 mL    60mL本色瓶
植物DNA纯化溶液B                        960602b    20 mL    30mL本色瓶
植物DNA纯化溶液C                        960602c    50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                                     220144       50套        塑料袋
通用洗柱液                                     220143       50 mL     60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125       10 mL    10mL本色瓶
使用手册                                        960602sc    1份           无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年

自备试剂
氯仿

使用方法
注意：植物DNA纯化溶液A和植物DNA纯化溶液B容易产生沉淀，植物DNA纯化溶液B比较粘稠，用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。
1.65℃预热植物DNA纯化溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.75 mL加入到10 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2.称取植物组织0.1-0.5 g左右，剪成微小的碎片，加入到有植物DNA纯化溶液A的10 mL塑料离心管中并短暂匀浆。也可以液氮研磨后将粉末加入到管中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞，因为二氧化硅会非特异地吸附DNA，降低DNA回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。
3.将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5 mL塑料离心管(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清, 不能吸取的植物碎片可以小心倒入)。
4.在匀浆液中加入0.5倍体积预热的植物DNA纯化溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。（由于溶液B比较粘稠，可以将1 mL 枪头剪去一截再吸取）。
5.65℃水浴3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。
6.如果需要得到比较纯净的DNA，可以选择需要氯仿的操作：加入200 uL自备氯仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。12,000 rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。然后加入1.5倍体积的植物DNA纯化溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。然后进入第8步。
7.如果选择不需要氯仿的操作（得到的DNA纯度较低），则直接在水浴后的裂解液中1.5倍体积的植物DNA纯化溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。然后进入第8步。
8.12,000 rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
9.将0.5 mL通用洗柱液加入离心柱中，12,000 rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
10.重复上步操作一次。
11.空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5 mL离心管中。
12.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加50-100 uL DNA洗脱液
（基因组纯化专用），室温放置3-5分钟。
13.12,000 rpm室温离心1分钟即得植物DNA溶液。
14.由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次，以洗脱得到更多的DNA。
15.直接取5-10 uL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。

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