CAT#:JW-920503
常温运输和保存

藻类RNA提取试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是专门针对藻类RNA提取开发的高效RNA提取试剂盒。该产品特点如下：
1.操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2.RNA纯度更高，OD260/OD280比值一般都在2.0左右，能够有效去除大多数藻类中的多糖污染。
3.适用于常见的各种海水和淡水藻类的RNA提取。
4.得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.性价比高于进口的柱式藻类RNA提取产品。

规格及成分
本产品用大纸盒包装
成 份                                编 号       规格        包装材料
藻类RNA提取溶液A    920503a    50 mL    60 mL本色瓶
藻类RNA提取溶液B    920503b    15 mL    15 mL棕色玻璃瓶
藻类RNA提取溶液C    920503c    50 mL    60 mL本色瓶
离心吸附柱                220144        50套        塑料袋
通用洗柱液                220143       50 mL    60 mL本色瓶
RNA洗脱液                71207        10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                    920503sc    1份       1份

注：溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。

运输及保存
常温运输和保存，溶液B需要4℃保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200 mg藻类（湿重）。注意海水藻类需要用纯净水洗涤2次以免藻类沉淀中残留的海水盐分干扰藻类RNA提取溶液A的作用。
2.液氮研磨破碎样品：取100-200 mg离心得到的新鲜藻类细胞沉淀放入含液氮的研钵中，迅速将其研磨成粉末后，将粉末转移到标记的塑料离心管中，加入1 mL藻类RNA提取溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。
注意：藻类RNA提取溶液A在4℃放置后容易产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.将液氮研磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中。
4.在离心管中加入0.3 mL的藻类RNA提取溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状（颜色将根据提取的藻类不同而不同）。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12,000-15,000 g离心3-5分钟，两相间将有细胞破碎物。
6.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 μL上清液不取。
7.加入等体积的藻类RNA提取溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些含糖量高的藻类，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8.先将一半的溶液（如果有沉淀，则将一半的悬浊液）转移到离心吸附柱中，13,000-15,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
9.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，13,000-15,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
10.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入藻类RNA提取溶液C后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量改为0.4、0.3和0.3 mL。
11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12.将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13.13,000-15,000×g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14.RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。如果电泳发现DNA污染严重建议减少起始样本的用量，已经纯化好的RNA可另购RNase-free DNase去除DNA污染。
15.RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH 7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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