CAT#:JW-230700
低温运输，-20℃保存

极威DOP-PCR试剂盒

产品及特点
DOP-PCR（Degenerate Oligonucleotide Primer PCR，简并寡聚核苷酸引物PCR）是扩增全基因组的方法之一，它利用中间含有6个随机碱基的22nt引物，通过两轮PCR（第一轮低温复性，第二轮高温复性）而将模板DNA扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用phi 29 DNA聚合酶的MDA，但在扩增高度降解的痕量DNA方面具有巨大优势，在法医鉴定领域具有重要应用。本产品是DOP-PCR试剂盒的升级版，它具有下列特点：
1.专门用于高度降解的DNA，方便，含有除模板DNA和引物以外的所有成份，简化了准备工作。
2.模板基因DNA用量一般为10-100pg，最后可以得到1-2ug扩增产物。
3.优化的引物浓度，非特异扩增降低。
4.使用高保真酶，扩增引起的突变率低。
5.长度在1000-5000bp之间，比常规DOP-PCR更长。
6.扩增产物的ADO（Allele Dropout）、基因组涵盖、CNV检测效果，重复性，一致性跟主流WGA方法相当。
7.扩增产物可用于二代测序、STR多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。
8.本产品足够50次50 mL体系的DOP-PCR反应。
9.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份                                        编号           规格        包装
DOP-PCR 缓冲液A                230700a    700 mL    1.5 mL绿盖管
DOP-PCR 缓冲液B               230700b    75 mL       0.5 mL本色管
DOP-PCR专用DNA聚合酶    230700c    25 mL       0.5 mL红盖管
DOP-PCR引物                       230700d    250 mL    0.5 mL白盖管
超纯水                                   210806       1 mL       1.5 mL蓝盖管
使用手册                                230700sc    1份           无
本产品采用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年，注意避免反复冻融。

自备试剂
DNA模板，引物，超纯水。

使用方法
1.在一干净的PCR管中，加入下列成分：
成分                                                    阴性对照    样品
DOP-PCR 缓冲液A                            13.5 mL    13.5 mL
基因组DNA模板(自备)或单个细胞          不加      10-100 pg
DOP-PCR缓冲液B                              1.5 mL     1.5 mL
DOP-PCR专用DNA聚合酶                  0.5 mL      0.5 mL
DOP-PCR引物                                       5 mL      5 mL
补超纯水到                                           50 mL      50 mL
2.放入PCR仪中按下列参数进行DOP-PCR。
过程                                   温度    时间
预变性                                 92℃    2分钟
第一轮PCR（6个循环）      92℃    1分钟
                                            30℃    1分钟
            按每秒0.3℃的速度升到68℃
                                            68℃    3分钟
第二轮PCR（14个循环）    92℃    30秒
                                            62℃    30秒
                                            68℃    3分钟
延伸                                     68℃    2分
                                             4℃     Forever
3.结束后取5-10 mL加上上样缓冲液后进行电泳。DOP-PCR 产物的长度一般在1000-5000 bp之间。
4.所得DOP-PCR产物经过纯化后可以用于后续PCR检测或其他分析。

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