CAT#:JW-230740-2
常温运输及保存

烟草DNA纯化试剂盒（过柱法B型）

产品及特点
烟草的分子鉴定是辨别烟草真伪，保证烟草质量，促进烟草产业现代化的十分重要的手段。但由于日晒，高温烘烤等各种处理极大地破坏了烟草DNA的完整性，同时植物富含的多酚多糖及其氧化物在上述处理过程中也会与DNA发生复杂的化学反应，所以从烟草中提取DNA比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题，本公司上开发了烟草专用核酸纯化试剂盒。本产品是专门用于从各种烟草样品中提取高质量的DNA的试剂。它具有下列特点：
1.去污染效果好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2.操作过程简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
3.产量高，每克烟草一般可以提取到5-50 ug DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.适合于各种烟草。
5.本产品足够50次烟草DNA微量提取。

规格及成分
成份                                        编号            规格        包装
烟草DNA纯化溶液A2           220721a2    25 mL    30mL本色瓶
烟草DNA纯化溶液B2           220721b2    25 mL    30mL本色瓶
A型通用上柱液                    220721c       40 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                           220144        50套       塑料袋
通用洗柱液                            220143       50 mL    60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组专用）    220125    10 mL    10mL本色瓶
使用手册                                220721sc    1份          无
本产品使用大扁盒包装

运输及保存
常温运输及保存，保存期为一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.65℃预热烟草DNA纯化溶液A2，待其沉淀溶化后充分颠倒混匀。取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2.称取 0.1-0.3 g 的烟草，加入到研钵中，加入少量液氮冷成固体后，迅速研磨成粉状。
3.将粉末转移到装有预热的烟草 DNA 纯化溶液 A2 的离心管中。
4.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
5.14000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，上清液的体积一般为300-400 µL)。
6.在上清液中加入等体积的烟草DNA纯化溶液B2，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
7.将离心管冰浴至少5分钟。
8.14000 g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5 mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7 mL左右。
注意：下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果省略第8-9步直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6 mL，否则没有空间加A型通用上柱液。
9.加入0.2 mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
10.14000 g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于烟草中腐殖酸的含量。将上清转移到新的1.5 mL离心管时，不要超过0.6 mL，否则没有空间加A型通用上柱液。如果有多余的可以弃之不用。
11.加入1.5倍体积的A型通用上柱液，上下颠倒30秒混匀。
12.分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液）。
13.加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
14.再加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高。
15.14000 g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
16.将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL塑料离心管中，加入50uL DNA洗脱液（基因组DNA专用）。
17.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
18.14000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为提取到的DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

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