CAT#:JW-230811
常温运输和保存

乳酸乳球菌电转感受态细胞制备试剂盒

产品及特点
本产品是用于制备乳酸乳球菌电转感受态细胞的试剂盒。它具有下列特点：
1.操作简单，即开即用，用户不需要花时间优化条件。
2.制备得到的电转感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3.主要用于乳酸乳球菌，但能否用于其他乳球菌不详。
4.最高转化效率可达到2×10E7个转化子/mg质粒DNA，但实际效率跟质粒长度、质粒浓度、恢复培养基等多种因素相关。
5.得到的电转感受态细胞可以用各种穿梭质粒DNA进行电转化。
6.本试剂盒足够制备20次，共200管乳酸乳球菌电转感受态细胞（每管70μL）。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成份                                                            编号        规格                包装
乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液A    230811a    50 mL×3    60 mL本色瓶
乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液B    230811b    50 mL       60 mL本色瓶
乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液C    230811c    30 mL       30 mL本色瓶
使用手册                                                230811sc    1份               无

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备物品
GM17液体培养基、含0.5M蔗糖和1%甘氨酸的GM17液体培养基、恢复培养基（含2mM CaCl2和20mM MgCl2的GM17液体培养基）、600nm分光光度计、电转仪。

使用方法
一：电感受态细胞的制备
1.挑取平板划线后培养得到的新鲜单菌落，接种到5mL自备的GM17液体培养基中。30℃静置厌氧培养12-16小时。
2.转移2.5mL上步所得培养菌液到50mL自备的GM17液体培养基中。30℃静置厌氧培养12-16小时。
3.转移4mL上步所得培养菌液到自备的250mL含0.5M蔗糖和2.5%甘氨酸的GM17液体培养基中，30℃静置厌氧培养直到OD600达到0.5-0.8之间。
4.将培养物转移到无菌离心管中6000rpm 10分钟，弃上清。离心时将洗涤液B和洗涤液C放冰上预冷待用。
5.加入7mL的溶液A重悬细菌。此时细菌的浓度约为1×10E9个/mL。
6.重悬后室温放置30分钟，4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。室温放置30分钟很重要，不能跳过。
7.加入1.5mL预冷的溶液B重悬细菌，然后4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。
8.再加入1.5mL预冷的溶液C重悬细菌，然后4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。
9.再加入0.7mL预冷的溶液B重悬细菌，按每管70μL分装到1.5-2.0mL的离心管中，此时细菌的浓度约为1×10E10/mL，共得10管电感受态细胞。
10.将感受态细胞全部放入-80℃冰箱待用。注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化乳酸乳球菌感受态细胞（本试剂盒不含相关试剂）
11.将装有70μL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。
12.加入500ng左右质粒DNA并轻柔混匀。
13.迅速转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
14.按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：12.5kV/cm (对0.2 cm的电击杯，则为2.5kV，200Ω，25μF，相当于脉冲长度为4ms)。注意：各厂家电转仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作。
15.电击后迅速将细胞和1mL预冷的恢复培养基（配方见自备物品）轻柔混匀，再转移到1.5mL的塑料离心管中，30℃静置厌氧培养2小时。
16.取0.2mL涂盘于含相应抗菌素（由质粒的抗性基因决定）的GM17平板上，30℃厌氧培养1-2天。
17.观察并记录转化子，计算转化效率，并进行后续实验。

关联产品
GM17液体培养基、乳球菌质粒DNA纯化试剂盒