CAT#:JW-240312
常温运输和保存，有低温成分

毛发线粒体DNA纯化试剂盒（沉淀法）

产品及特点
毛发的主要成分是角化蛋白，可以抵抗自然界中大多数的酶和化学物质，不易分解，正是因为毛发物证的不易破坏性、形态稳定性，毛发物证对于案件侦破具有关键作用。毛发分毛根、毛干、毛尖三部分。毛根含有染色体DNA，但自然脱落的毛发根部含染色体DNA量极少。毛干部分含有线粒体DNA，随着近年来测序技术的发展，通过毛干线粒体检测更加准确。目前市场上专门用于毛发样品DNA纯化的产品很少，为此本公司开发了本产品。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装，但蛋白酶K溶液塑料袋包装，低温运输
成分                                            编号           规格        包装
毛发DNA提取溶液A                  240312a    50 mL    60 mL本色瓶
毛发DNA提取溶液B                  240312b    25 mL    30 mL棕玻瓶
毛发DNA提取溶液C                  240312c    50 mL    60 mL本色瓶
毛发DNA纯化还原剂                 240312d    5 mL       5 mL本色瓶
蛋白酶K溶液（10 mg/mL）         220137    1 mL      2.0 mL红盖管
通用洗柱液                                   220143    50 mL    60 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10 mL    10 mL本色瓶
离心吸附柱                                     220144    50套        塑料袋
cccDNA 纯化溶液 A                     220502a    30 mL    30 mL 棕玻瓶
cccDNA 纯化溶液 B                     220502b    10 mL    10 mL 棕玻瓶
cccDNA 纯化溶液 C                     220502c    30 mL    30 mL 本色瓶
使用手册                                     240312sc    1份            1份

运输及保存
常温运输及保存（其中蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存。溶液B需要常温运输，4℃保存），有效期一年。

自备物品
1.5 mL塑料离心管、2 mL塑料离心管。

使用方法
1.将30-50 mg左右头发充分剪碎成芝麻大小，将剪碎后样本转移到一个干净的1.5 mL塑料离心管中。注意：最好从靠近根部的地方剪取样品。
2.加入1 mL毛发DNA提取溶液A、50 μL还原剂和20 μL蛋白酶K溶液（10 mg/mL），37℃保温10小时（一般过夜保温就可以）。注意：最好让反应体系处于摇晃状态，此保温长度一般可以让毛发溶化。
3.加入0.5 mL的毛发DNA提取溶液B，振荡器上振荡30秒充分混匀。
4.12,000 rpm室温离心5分钟，小心将上清转移到新的2 mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的毛发DNA提取溶液C，上下颠倒30秒充分混匀。
6.将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8 mL混合液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm室温1分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。
7.将0.7 mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12,000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8.空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
9.将离心吸附柱放置在一新的1.5 mL塑料离心管中，加入0.2 mL DNA洗脱液（基因组DNA专用）。
10.12,000 rpm离心1分钟，管底即为头发DNA溶液。
11.在 0.2 mL 含有 cccDNA 的头发DNA溶液中，加入 0.6 mL cccDNA 纯化溶液 A，充分吹打或振荡 2 分钟。
12.加入0.2 mL cccDNA 纯化溶液B，振荡1分钟。
13.室温14,000 rpm离心 3 分钟，小心将上清液（约0.6 mL）转移到新的塑料离心管中。
14.在离心管中加入等体积（0.6 mL）cccDNA 纯化溶液C，充分颠倒混匀。
15.室温14,000 rpm离心15分钟，小心弃上清，不要吸走管底微量的沉淀。
16.加入1 mL自备的75%乙醇后，立即室温 14,000 rpm离心1分钟，小心弃上清，不要吸走管底微量的沉淀
17.将离心管再次14,000 rpm离心半分钟，小心吸走残留的液体（约50-100 μL）。
18.加入10-100 μL 超纯水或TE缓冲液，轻柔吹打溶解后可以立即用于后续实验。长期放置需要放-20℃。

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