CAT#:JW-231118
低温运输，-20℃保存

2×唾液直扩探针法qPCR MasterMix

产品及特点
本产品是在探针法qPCR MasterMix基础上改进的产品，可以直接用唾液为模板进行PCR扩增，不需要任何DNA纯化过程。本产品具有下列特点：
1.以2×Mix提供，用户只需准备模板、引物和探针即可以进行探针法实时定量PCR。
2.直接以唾液为模板，不需要任何DNA纯化和释放过程。
3.唾液用量可高达到总反应体积的35%，20uL体系可以用7uL唾液，避免了漏检。
4.灵敏度高，可以检测10拷贝的DNA/反应。
5.提供足够8次的阳性对照引物、探针和模板。
6.可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
7.本产品反复冻融20次对扩增效果没有任何影响。
8.本产品足够100次20uL体系的探针法qPCR反应。
9.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                                        编号        规格    包装
2×唾液直扩探针法qPCR MasterMix    231118a    1 mL    1.5mL红色盖
人基因组DNA溶液（10E4拷贝/uL）    231118b    50uL    0.5mL蓝盖管
使用手册                                            231118sc    1份       无
本产品采用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
唾液、自备引物、超纯水。

使用方法
下列操作以定性实验为例
1.如果有N个样品，则设置N+2个反应，多出的一个是扩增阴性对照（NC），一个是扩增阳性对照（PC）。可以使用确认能被所用引物和探针扩增并检测的DNA作为阳性对照。本试剂盒提供少量人基因组DNA溶液为阳性对照。在N+2个PCR管中按下表设置PCR反应：
成分                                                       N个样品管        NC管           PC管
2×唾液直扩探针法qPCR MagicMix        各10 uL            10 uL         10 uL
自备引物对（10uM each）                    各2 uL               2 uL            2 uL
自备探针（5uM）                                   各1 uL             1 uL             1 uL
N个唾液样本                                           各1-7 uL           -                  -
人基因组DNA溶液                                   -                       -                  7 uL
补自备超纯水                                       均到20 uL          到20 uL      到20 uL
2.放入荧光PCR仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考。具体需要以使用的引物探针Tm和靶分子长度进行调节。一般选择三步法PCR：
步骤                                  反应参数        备注
预变性                           95℃ 5分钟    
PCR（35-45次循环）    95℃ 15秒        靶分子长度最好在80-200bp
                                    55-65℃ 15-30秒    在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
                                       72℃ 30秒    
如果引物Tm值接近60℃，也可以选择两步法PCR：
步骤                               反应参数            备注
预变性                            95℃ 5分钟    
PCR（35-45次循环）    95℃ 15秒        靶分子长度最好在80-200bp
                                        60℃ 60秒        在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
3.数据处理
一般情况下，阴性对照Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。本试剂盒提供的阳性对照

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