CAT#:JW-221200-5
低温运输，-20℃保存

RNA探针地高辛标记试剂盒（加尾法）

原理及特点
本产品是基于TdT末端转移酶能够在RNA 的3’端添加NTP尾巴的原理上开发的，具有下列特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.可用于单链RNA和RNA Oligo标记
3.可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛标记的核苷酸等）。
4.提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种选择。
5.同时提供非标记的ATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6.标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度RNA检测）、小RNA Northern、Southern Blot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

规格及成分
本产品采用五孔盒包装
成份                                            编号        规格     包装
TdT缓冲液，5×                        221200a    20 uL    0.5mL绿盖管
TdT末端转移酶（10 U/uL）    221200b    10 uL    0.5mL红盖管
ATP，2 mM                            221200c      5 uL     0.5mL黄盖管
DIG-11-UTP                         11-221036     5 uL      0.5mL本色管
超纯水                                        210806    1 mL    1.5mL蓝盖管
使用手册                                  221200sc    1份            无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年

自备试剂
RNA模板

使用方法
1.在0.2 mL微量离心管中按下表设置一个20 uL体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针RNA的浓度）：
成份                                         用量
自备RNA模板                         100-200 pmol
TdT Buffer，5×                        4 uL
DIG-11-UTP                            1 uL
ATP，2 mM                            1uL或不加
TdT末端转移酶（10 U/uL）    2 uL
超纯水                                    补到20 uL
注: ATP可以不加，这样得到的加尾全部是标记核苷酸，但由于DIG或biotin的空间阻碍，这种探针的灵敏度并不是最佳。如果在加尾反应时掺入一定比例的ATP，控制标记核苷酸的密度不至于太高，这样反而可以提高探针的比活。标记核苷酸和非标记的ATP的具体比例为多少，可以自己优化。一般可以选择1：2。
2.37℃反应30分钟。如果没有非标记核苷酸存在，一般只能加尾3-5个标记的核苷酸（因为标记基团通过空间阻碍抑制延长反应）；如果在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸ATP（其他NTP也可，只是本试剂盒只提供ATP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸。
3.70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4.如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的RNA探针的泳动速度将低于没标记的RNA分子。
5.如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针RNA进入有机相而丢失。
6.使用时需将探针以1-8 ng/uL的终浓度加入到杂交液中。如果不立即使用，非同位素标记的探针RNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针RNA不能放置。

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