CAT#:JW-221222-50
常温运输和保存

土壤RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的 RNA一直是十分棘手的问题。本产品具有下列特点：
1.处理一个样品只需要约十几分钟。
2.去污染效果好，RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右。
3.得到的RNA可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。
4.性价比高于进口的土壤 RNA 提取产品。
5.试剂无毒无害, 环保。
6.可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                编号         规格           包装
土壤RNA纯化溶液A    221222a     55 mL    60mL棕色瓶
土壤RNA纯化溶液 B    221222b    18 mL    30mL本色瓶
土壤RNA纯化溶液 C    221222c    27mL    30mL本色瓶
土壤RNA纯化溶液 D    221222d    30 mL    30mL本色瓶
离心吸附柱                    211207      50套       塑料袋
通用洗柱液                    220143     50 mL    60mL本色瓶
RNA洗脱液                    971207    10 mL    10mL本色瓶
使用手册                        221222sc    1份    无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，溶液A 需要放4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿，RNase-free 收集管。

使用方法
1.称取 0.1-0.5 g 的土壤，加入 1 mL 土壤RNA纯化溶液A，震荡器上剧烈震荡 5-10分钟。注意:一定要让管底的土壤震荡起来。注意：溶解土壤RNA纯化溶液A沉淀。土壤RNA纯化溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2.稍微静置后将上清液转移至一个干净的 1.5  mL 塑料离心管中。
3.在离心管中加入 0.3 mL 的溶液B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温 12000 rpm 离心 3-5 分钟。
5.将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100 μL 上清液不取。
6.在上清液中加入 0.5 mL 的溶液 C 和 0.2 mL 的自备氯仿，用手上下颠倒或振荡器振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7.室温 12000 rpm 离心 3 分钟，两相间将有白色膜状物（蛋白质）形成。
8.将上清液（约 1 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
9.在上清液中加入 0.5 倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡 30 秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
10.将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚 12000 rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中， 套入收集管中后 12000 rpm 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
12.加 0.5  mL 洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
13.加 0.5mL 洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
14.将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。 15 可选步骤：（膜上消化 DNA）
15.将 5Ul 的 RNase-free DNase 加入到 45ul DNase buffer 中混匀，加入到离心吸附柱中，室温放置 5-15 分钟（如果后续电泳检测DNA 污染没消化干净，可加大 DNase 的用量和室温放置时间延长）。
16.直接在离心吸附柱中加 0.5ml 的去酶液，盖上盖后颠倒混匀。
17.室温 12000 g 离心 1 分钟，弃穿透液。
18.再加 0.5ml 的去酶液，12000 g 室温离心 1 分钟，弃穿透液。
19.室温 12000 g 离心 2 分钟，此步非常重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
20.将离心吸附柱套入到一个自备的 RNase-free 收集管中，加入 30-100 μL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
21.12000 rpm 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

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