CAT#:JW-230336
低温运输，-20℃保存

LAMP专用钙黄绿素溶液，20×


产品及特点
钙黄绿素（Calcein）的CAS号为1461-15-0，其分子结构式如下：

钙黄绿素可用作LAMP可见光染料，其原理是在有Mn离子存在的LAMP扩增体系，如果没有LAMP核酸扩增发生，Mn离子和钙黄绿素结合，在紫外照射时不发荧光。如果有LAMP核酸扩增发生，则DNA合成时将产生大量焦磷酸，这些焦磷酸将优先跟Mn2+结合，钙黄绿素则跟体系中多余的Mg2+结合，在紫外照射时将发荧光。标准LAMP反应中的镁离子浓度通常在4-10mM之间（跟引物浓度，dNTP浓度相关）。其原理图如下：

本产品就是专门用于LAMP扩增的钙黄绿素染料，为20×，它具有下列特点：
1.即开即用，含有Mn离子，可以直接加入到含Mn的LAMP扩增体系中。
2.其最佳用量根据LAMP体系不同需要用户自己优化，但一般需要终浓度为0.5 mM的Mn离子，Mg离子终浓度跟标准LAMP反应的Mg离子浓度一样。
3.本产品足够1000次左右的20 μL体系的LAMP反应。
4.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                               编号       规格    包装
LAMP专用钙黄绿素溶液，20×    230336    1 mL    2 mL棕色管
使用手册                                   230336sc    1份        1份
本产品使用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法
1.将本产品放置在室温融化30分钟，震荡10秒钟，短暂离心后放冰上待用。
2.按下表设置20 μL体系的LAMP反应：
成份                                    样品管    阴性对照
4×LAMP Mix                        5 μL    5 μL
自备FIP引物终浓度            0.8 μM     0.8 μM
自备BIP引物终浓度            0.8 μM    0.8 μM
自备F3引物终浓度            0.2 μM    0.2 μM
自备B3引物终浓度            0.2 μM    0.2 μM
自备Loop F引物终浓度（可选项）    0.4 μM    0.4 μM
自备Loop B引物终浓度（可选项）    0.4 μM    0.4 μM
自备模板DNA               1-100ng    不加
Bst DNA聚合酶(8 U/μL)        1.5 μL    1.5 μL
MnCl2溶液，5 mM               2 μL        2 μL
本产品                                    1μL       1μL
补水到                                    20 μL    20 μL
3.65℃保温1小时。
4.LAMP扩增后在紫外灯下检测，有核酸扩增的将发荧光，管中液体颜色为黄绿色。没有扩增的将不发荧光，管中液体颜色为橘黄色。典型的实验结果如下（左边的有扩增，黄绿色。右边的没有扩增，溶液颜色为橘黄色）：

5.也可以电泳检测实验结果（强烈不推荐此法，因为电泳时产生的气溶胶非常容易污染环境，使得今后用同一引物扩增时产生假阳性）：取5-10 μL扩增产物和自备的上样液混合，上样，进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，有LAMP扩增的样品将可见LAMP特征性电泳图谱。

关联产品
羟基萘酚蓝溶液（HNB溶液），1.5 mM