CAT#:JW-221027
常温运输，4℃保存

CHAPS细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液

产品及特点
本产品为CHAPS细胞裂解和免疫沉淀缓冲液，用于裂解动物培养细胞制备总蛋白抽提物。它具有下列特点：
1.其最大特点是提取的总蛋白可以保持蛋白和蛋白复合体的构型，非常适合后续的免疫共沉淀实验和酶活性检测。
2.不含氨基成分，可使用NHS-ester类的交联试剂。
3.跟Bradford法、Lowry法和BCA法蛋白浓度测定试剂兼容。
4.裂解跨膜和细胞膜蛋白质提取后保持分子间的相互作用。本试剂在反应过程中能保持蛋白质构象以及蛋白质复合物的组装。
5.250mL规格足够处理800个10cm培养皿培养的细胞样本。
6.起始材料可使用培养细胞，也可以使用实体组织。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大立盒包装
成分                                                            编号        规格       包装
CHAPS细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液    221027    250 mL    250 mL本色瓶
使用手册                                            221027sc        1份           无

运输及保存
低温运输，4℃保存，有效期为12个月。

自备物品
蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂、PBS、自选免疫沉淀抗体、免疫沉淀珠（G蛋白或A蛋白珠）、离心机、细胞刮子、冷藏室或冷藏箱等。

使用方法
一、实验准备
1.根据靶蛋白的特点，将自备的蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂加入到本产品（CHAPS细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液）中，使其终浓度达到这些抑制剂的工作浓度，混匀后放冰上待用。同时将其他所需物品（如细胞刮子，离心管、Dounce玻璃匀浆器等）进行预冷。下述所有溶液均为预冷溶液，所有离心均为4℃离心。

二：培养细胞样本的裂解
2.用1-3个10cm培养皿培养细胞，待其汇合度达到80-90%时为止。
3.按标准流程用PBS洗涤细胞三次，每次用5mL PBS。此步可去除残留的培养基血清蛋白以避免在后续Western印迹杂交时出现血清蛋白条带。
4.在每个培养皿中加入300μL补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，轻柔倾斜和旋转让缓冲液覆盖细胞表面，然后用细胞刮子将细胞刮下并转移到1.5mL离心管中。
5.冰上放置10分钟。每隔2-3分钟用手指弹击离心管数次以让细胞膜充分溶解，然后直接进入第8步操作。注意不要涡旋震荡，避免蛋白变性或蛋白复合体解离。

三、实体组织样本的裂解
6.对冷冻的实体组织：将100mg在-80℃或液氮冷冻的实体组织放在装有液氮的研钵中研磨成粉末，再转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中，加入300μL预冷的补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，温和手动匀浆6次后冰浴30分钟，每间隔5分钟摇晃一次，然后直接进入第8步操作。
7.对新鲜的实体组织：用自备的预冷PBS洗涤100mg经过胰酶处理的新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清。在组织沉淀中加入300μL预冷的补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，轻柔吹打3次，在冰上用Dounce玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔5分钟摇晃一次，然后直接进入第8步操作。

四、免疫共沉淀
8.用最高离心速度离心上步所得细胞裂解液15分钟，将上清液转换到预冷的1.5mL离心管中。
9.分30μL上清液做对照A，剩余的样本用于免疫沉淀。预留的对照A可以放冰上待用，如果当天没用完，可以放﹣20℃或﹣80℃长期保存。后续的对照B和对照C处理相同。
10.在上清液中加入所选免疫沉淀抗体（最佳抗体用量需自行摸索），轻柔颠倒混匀30秒后放摇床上在冷藏室或冷藏箱内摇晃至少15分钟，使抗体和上清液中的靶蛋白充分结合。如果有多管相同的重复样本，后续实验一样，可以汇集在一起后加入抗体。如果后续实验不同，则最好不要汇集。
11.按300μL-2mL混合液加60μL免疫沉淀珠的比例加入免疫沉淀珠，轻柔颠倒摇晃30秒后放摇床上在冷藏室或冷藏箱内摇晃至少30分钟以让免疫沉淀珠和靶蛋白-抗体形成复合物。
12.3000rpm离心5分钟，将上清液转移到新的1.5mL离心管中作为对照B预留，沉淀为蛋白-抗体-沉淀珠复合物。注意：吸取上清时不要触及蛋白-抗体-沉淀珠复合物沉淀。
13.向复合物沉淀中加入300μL含蛋白酶抑制剂的本产品，180度轻柔旋转离心管3次，3000rpm离心5分钟，保留上清液作为对照C。
14.重复上步洗涤步骤至少2次，这两次的上清液不需要保留。
15.最后一次洗涤后，14000 rpm离心15分钟使复合物沉淀充分沉淀，再吸弃残留上清液。
16.复合物沉淀可立即用自选的方法进行靶蛋白洗脱。如果后续实验为PAGE电泳，可以用1×PAGE上样液洗脱。在每60uL免疫沉淀珠得到的沉淀中加入100uL上样液，涡旋震荡30秒，60℃保温10分钟，3000rpm离心5分钟，上清即含有洗脱的靶蛋白和其抗体。
17.洗脱的靶蛋白可用于PAGE电泳、Western杂交和活性检测等后续实验，也可以放﹣20℃或﹣80℃长期保存。注意：用洗脱的靶蛋白进行后续实验时需要用三个对照样本一起实验。Western杂交时，最好选择跟本次实验所用抗体不一样的抗体。

关联产品
CHAPS Lysis Buffer（CHAPS裂解液）、Dounce玻璃匀浆器