CAT#:JW-221028-50
常温运输及保存

质粒DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本试剂盒用于质粒DNA小量制备与纯化。基于改良后的碱变性法，用碱使基因组DNA和质粒DNA均变性，再用酸中和，质粒DNA可以快速复性，而基因组DNA不能快速复性，故可以通过离心去除。除去基因组DNA后的含质粒DNA的上清用离心吸附柱吸附质粒DNA，洗去杂质，即可得到纯化的质粒DNA。本产品具有下列特点：
1.快速、步骤少，整个操作在30分钟左右完成。
2.不需要预平衡离心吸附柱。
3.通用洗柱液即开即用，不需要用户额外加乙醇。
4.溶液B中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。
5.产量高，一次可以处理1-4mL过夜培养的G+菌液，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL（取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝）。
6.本产品足够50次微量提取。
7.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大纸盒包装
成分                                               编号       规格        包装
质粒DNA纯化溶液A                    221028a    13mL    15mL本色瓶
质粒DNA纯化溶液B                    221028b    13mL    15mL本色瓶
质粒DNA纯化溶液C                    221028c    18mL    30mL本色瓶
RNase A溶液,10mg/mL                220714    0.6mL    2.0mL本色管
离心吸附柱                                    220144    50套        塑料袋
通用洗柱液                                    220143    50mL    60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10mL    10mL本色瓶
使用手册                                        221028sc    1份            无

运输及保存
常温运输和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
无

使用方法
1.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16小时（摇床转速200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统的处理能力而降低质粒DNA的质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
2.用1.5mL离心管收集1-4mL过夜培养饱和菌液，室温12,000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
3.第一次使用本试剂盒时，先将本试剂盒提供的全部RNase A溶液加入到质粒DNA纯化溶液A（简称溶液A，下同）中，摇匀后再取用，未用完的溶液A放4℃保存。
4.加入250μL溶液A到第2步得到的细菌沉淀中，用枪头充分吹打使菌体重悬。注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
5.加入250μL质粒DNA纯化溶液B（下面简称溶液B，如果溶液B在低温放置产生沉淀，须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和颠倒4-6次混匀，蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠。注意：千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。
6.冰上放置不超过5分钟。注意：冰上放置不要超过5分钟，否则质粒DNA会有碱损伤。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的碱，降低其效率。如果溶液B颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且跟厂家联系。
7.加入350μL冰上预冷的质粒DNA纯化溶液C（下面简称溶液C），温和反复颠倒4-6次，溶液将变成无色，将有白色絮状沉淀产生。
8.冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。不能短于5分钟，一般10分钟。
9.12,000rpm离心3分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，部分絮状物悬浮在上清液中属正常现象，吸取上清时避开这些悬浮物即可。如果此步的离心在4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。
10.静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合。
11.室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
12.加入500μL的通用洗柱液到离心吸附柱中，室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13.重复上步1次。
14.室温12,000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中）。
15.将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30-100μL65-80℃预热的DNA洗脱液（基因组DNA专用），室温放置2分钟。
16.室温12,000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA溶液。

关联产品
质粒DNA纯化试剂盒（沉淀法）