CAT#:JW-230372-50
常温运输和保存，有低温成分

海洋动物DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是在动物DNA纯化试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物及其他软体动物的基因组DNA提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、乌贼、蜗牛等动物，可以有效去除海洋动物及其他软体动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。本产品主要特点是:
1.使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。
2.提取到的基因组DNA完整性，其中最长可以到达长度一般在20-50kb。
3.DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50Kb左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4.操作简单安全，1小时内即可获得超纯的基因组DNA，纯化过程中不需要使用苯酚氯仿等有机试剂。
5.应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。
6.性价比高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成分                                                编号             规格    包装
海洋动物DNA纯化溶液A                230372a     50mL    60mL本色瓶
海洋动物DNA纯化溶液B                230372b    15mL    20mL棕色瓶
海洋动物DNA纯化溶液C                230372c    50mL    60mL本色瓶
蛋白酶K溶液，10mg/mL                220137     1mL      1.5mL白盖管
通用洗柱液                                    220143      50mL    60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125     10mL    10mL本色瓶
离心吸附柱                                    220144      50套      塑料袋
使用手册                                      230372sc    1份               无

运输及保存
常温运输和保存，但蛋白酶K溶液(10mg/mL)需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
无水乙醇、RNase A溶液（100mg/mL）

使用方法
1.使用前请先在海洋动物DNA纯化溶液C中加入17mL自备的无水乙醇，在专用洗柱液中加入60mL的自备无水乙醇。
2.切取不多于30mg的海洋动物及其他软体组织材料，放入装有200μL海洋动物DNA纯化溶液A的离心管中，涡旋振荡15秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA，可加入自备的40μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡15秒，室温放置5分钟。
3.加入20μL蛋白酶K溶液，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置，直至海洋动物组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同动物组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15秒。
4.加入200μL海洋动物DNA纯化溶液B，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入海洋动物DNA纯化溶液B时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5.在混合液中加入200μL无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个硅胶膜离心吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
7.向离心吸附柱中加入500μL海洋动物DNA纯化溶液C，12,000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
8.向吸附柱中加入600μL专用洗柱液，12,000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
9.重复上步操作一次。
10.将硅胶膜吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的专用洗柱液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的专用洗柱液去除，否则其中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11.将硅胶膜离心吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μLDNA洗脱液（基因组纯化专用），室温放置2-5分钟，12,000rpm离心1分钟，将溶液收集到离心管中。注意：专用DNA洗脱液的体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

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