CAT#:JW-230378-20
低温运输、-20℃保存

DNA片段化试剂盒（酶法）

产品及特点
本产品利用酶法对DNA进行片段化，其主要特点如下：
1.即开即用，用户不用单独购买各种成分并进行优化。
2.操作简便省时，只需要在样本中加入片段化酶，再反应一段时间即可。
3.跟后续的高通测序（NGS）兼容。
4.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
5.性价比高。
6.本产品足够20次DNA片段化反应。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用10孔盒包装
成份                                    编号           规格         包装
片段化酶1                        230378a        20μL       0.5mL红盖管
片段化酶1稀释液             230378b        1040μL    1.5mL绿盖管
DNA片段化溶液A            230378c        20μL       0.5mL白盖管
DNA片段化溶液B            230378d        50μL       0.5mL白盖管
DNA片段化反应终止液    230378e        400μL    0.5mL本色管
150 mM MgCl2溶液        230378f         40μL      0.5mL本色管
片段化酶2稀释液            230378g        200μL     0.5mL绿盖管
片段化酶2                       230378h        20μL       0.5mL红盖管
DNA级EDTA溶液           5-756               50μL      0.5mL本色管
超纯水                           210806-100    1mL×10    1mL蓝盖管
使用手册                        230378sc        1份    无

运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
电泳上样缓冲液，推荐使用Orange G作为电泳示踪剂，因为溴酚蓝（BPB）和二甲苯青（Xylene Cyanol）与DNA片段重叠，应避开使用。

使用方法
一、基因组DNA片段化反应
1.确定反应体积。
2.基因组DNA在100ng以下使用10μL反应体系；基因组DNA在100ng～1μg之间使用20μL反应体系。注意：基因组DNA超过1μg时，以1μg/20μL的反应体系增加反应管数或扩大反应体系，很好地为5μg/100μL。
3.将2台Thermal Cycler PCR仪的温度分别设定为16℃和70℃。只有1台仪器时设定为16℃。
4.在冰上将基因组DNA以外的下列试剂添加到0.2mL反应管中，配制混合液，充分混匀后再加入基因组DNA。用移液枪轻轻吸打或用手轻弹管壁，离心后使用，避免产生气泡，不能使用振荡器混匀。
成分                            体积
片段化酶1稀释液     1.9μL
DNA片段化溶液A    1μL
DNA片段化溶液B    1μL
自备的基因组DNA    1μg
超纯水                     加到19μL
注意：以上为基因组DNA 1μg/20μL反应体系；如果基因组DNA量少，那么要调整为适合的体系。
5.片段化酶1的稀释（使用前新鲜调制）。稀释方法如下：在冰上按下列顺序在1.5mL 反应管中加入450μL超纯水和50μL片段化酶1稀释液，充分混匀。轻轻振荡离心。将1μL的片段化酶1加入到配好的混合液中，然后将200μL的移液枪调到100μL刻度后，轻轻吸打10次左右，避免产生气泡。再上下颠倒混匀（5次以下），离心。不能使用振荡器混匀。注意：稀释后的片段化酶1请在10分钟内使用，不能保存。
6.确认Thermal Cycler PCR仪的温度在16℃后，将1μL稀释后的片段化酶1添加到上述加入基因组DNA的混合液中。吸打数次后，立即在16℃条件下进行反应。推荐反应时间5-8分钟。注意：在冰上进行试剂添加和混匀的操作。
7.不要移动反应管，在Thermal Cycler PCR仪上直接加入20μL的DNA片段化反应终止液终止反应。用移液枪吸打2-3次后，再转移到冰上吸打数次。
8.确认Thermal Cycler PCR仪温度为70℃后，将吹打后溶液的0.2mL 反应管转移到PCR仪上。
9.70℃反应5分钟后，转移到冰上。注意：在冰上放置2分钟以上。
10.只进行DNA片段化反应时，在冰上放置后的0.2mL 反应管中加入1μL的 0.5M EDTA溶液，用移液枪吸打，充分混匀后，进行DNA片段的精制。
二、末端平滑化反应
11.将两台扩增仪分别设定为16℃和70℃。如果只有一台，则设定为16℃。
12.片段化酶2的稀释（使用前调制）。稀释方法：在冰上准备0.2mL反应管，试剂按下述的比例（片段化酶2稀释液:片段化酶2=9:1）配成混合液后，轻轻吸打，充分混匀，避免产生气泡。
13.在在冰上放置后的0.2mL 反应管中加入2μL的150mM MgCl2溶液，移液枪吸打，充分混匀，避免产生气泡。不能使用振荡器混匀。
14.将2μL稀释后的片段化酶2添加到0.2mL反应管中，吸打数次混匀后，立即在16℃反应10分钟。注意：此步操作在冰上进行。
15.反应结束后，把0.2mL反应管转移到冰上。只有一台扩增仪时，把温度调至70℃。
16.加入1μL的0.5M EDTA溶液，充分吸打混匀后离心。
17.确认Thermal Cycler PCR仪设定的温度为70℃后，将0.2mL反应管转移到Thermal Cycler PCR仪上反应5分钟。
18.将0.2mL反应管转移到冰上。
19.片段化DNA的确认：取相当于200～250ng量基因组DNA（在冰上放置后）的反应液约10μL进行1.5%琼脂糖凝胶电泳。

关联产品
DNase I溶液