CAT#:JW-221079-50
常温运输和保存

白色念球菌RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
白色念珠菌（Candida albicans），是一种真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。因此对其进行分子生物学研究具有重要意义。但其RNA的提取不是非常容易，所以本公司专门开发了专门用于白色链珠菌总RNA快速提取的本试剂盒，其主要特点是：
1.操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
2.RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.RNA产率高，一般在20-70g/mL白色念珠菌培养物(约2.0×10E个细胞)。
5.得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
6.可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。
7.本产品足够50次微量提取。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                        编号            规格    包装
白色链珠菌RNA纯化溶液A    221079a    20 mL    30 mL本色瓶
白色链珠菌RNA纯化溶液B    221079b    25 mL    30 mL棕玻瓶
白色链珠菌RNA纯化溶液C    221079c    75 mL    125 mL本色瓶
白色链珠菌RNA纯化溶液D    221079d    25 mL    30 mL本色瓶
离心吸附柱                            211207       50套       自封袋
通用洗柱液                            220143       50 mL    60 mL本色瓶
RNA洗脱液                            971207       10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                                221079sc    1份           无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备物品
氯仿，RNase-free收集管，液氮，球磨仪，超声破碎仪

使用方法
1.将50mg左右湿重的样品(或100 mg左右的菌落)转移到1.5 mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10 mL液体真菌在1.5 mL塑料离心管中15000g离心1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2.将真菌沉淀在液氮中冷凝成固体，再转移到一个干净的研钵中，在液氮中研磨成粉。再把粉转移到到离心管中。最后加入65℃预热的0.4 mL白色念球菌RNA纯化溶液A。
3.也可以采用球磨破碎仪或超声破碎仪在0.4mL白色念球菌RNA纯化溶液A中破碎细胞。
4.加入0.4 mL白色念球菌RNA纯化溶液B，剧烈振荡30秒。
5.65℃保温5分钟。
6.室温15000g离心3分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
7.再加入0.1 mL白色念球菌RNA纯化溶液B和0.1mL自备氯仿。此步可以不加氯仿，但纯度稍低。
8.涡旋振荡混匀30秒。
9.室温15000g离心3分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。注意：1.5mL的离心管装不了后续要加的溶液。
10.加入1.5 mL的白色念球菌RNA纯化溶液C（约1.2-1.5 mL）和0.5 mL的白色念球菌RNA纯化溶液D，充分颠倒混匀。
11.将0.7 mL混合液转移到离心吸附柱中，15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。重复此操作直到将所有混合液挂柱。
12.加入0.5 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
13.重复上步洗涤一次。
14.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
15.将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100L RNA洗脱液。
16.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

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