CAT#:JW-221095
常温运输和保存

质粒DNA大量纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本试剂盒是用于质粒DNA大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100 mL过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。本产品具有下列特点：
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间。
3.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 ug/mL。
4.用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5.本产品足够5次质粒DNA大量纯化。
6.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份                                        编号            规格        包装
质粒DNA大量纯化溶液A        221095a    26 mL    30 mL本色瓶
质粒DNA大量纯化溶液B        221095b    26 mL    30 mL本色瓶
质粒DNA大量纯化溶液C        221095c    36 mL    60 mL本色瓶
RNase A溶液（10mg/mL）    220714     0.6 mL    1.5 mL本色管
DNA离心吸附柱（大提）        220351     5套           塑料袋
通用洗柱液                              220143     100 mL    120 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                                221095sc      1份           无
本产品采用大扁盒包装

运输及保存
常温运输和保存，其中RNase A溶液需要低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
50 mL塑料离心管

使用方法
1.用250 mL离心管收集100-300 mL菌液，5000 rpm 离心10分钟，去除上清。
2.往细菌沉淀中加入5 mL质粒DNA大量纯化溶液A，充分振荡悬浮（第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均匀，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存）。注意：充分重悬细胞沉淀使之无细胞结块状物对于获得高的质粒产量十分重要。
3.加入5 mL质粒DNA大量纯化溶液B，温和翻转10余次至蓝色变得均匀。室温放置5-10分钟裂解细菌。注意：避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。质粒DNA大量纯化溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和质粒DNA大量纯化溶液B中的碱，降低其效率。如果质粒DNA大量纯化溶液B颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且速跟厂家联系。
4.加入冰浴的7 mL质粒DNA大量纯化溶液C，颠倒混匀，此时混合液应该从蓝色变成无色，如果不发生颜色变化，则表示质粒DNA大量纯化溶液C变质，需要联系厂家。将混合液冰上放置10分钟，将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
5.6000 rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
6.将上清液（约20 mL）转移到DNA离心吸附柱（大提）中，放入50 mL套管中。由于此时的溶液比重较大，部分沉淀物悬浮在上清液中属正常，吸取上清时避开漂浮的沉淀物即可。
7.6000 rpm离心5分钟，质粒DNA将与DNA离心吸附柱（大提）中的膜结合，弃穿透液。
8.将10 mL通用洗柱液加入到DNA离心吸附柱（大提）中，室温静置2分钟后6000 rpm离心5分钟，弃穿透液。
9.重复上步一次，即将10 mL通用洗柱液加入到DNA离心吸附柱（大提）中，室温静置2分钟后6000 rpm离心5分钟，弃穿透液。
10.室温6000 rpm空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步对去除残留通用洗柱液很重要，否则通用洗柱液会影响DNA的使用。
11.将DNA离心吸附柱（大提）放入一个自备的、干净的50 mL塑料离心管中，加0.5 mL DNA洗脱液（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2分钟后6000rpm 离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
12.本试剂盒中的离心吸附柱吸附能力较强，所以再用1 mL DNA洗脱液洗脱3-4次才能把绝大部分质粒DNA洗脱下来。得到的DNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA洗脱液不够，可以用自备的DEPC水代替。注：一般情况下，第一次洗脱可以洗脱约25%的质粒DNA；第二次洗脱可以洗脱约35%的质粒DNA；第三次洗脱可以洗脱约20%的质粒DNA；第四次洗脱可以洗脱约10%的质粒DNA；第五次洗脱可以洗脱约8%的质粒DNA。
13.合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。如果需要使用液相内毒素清除剂清除质粒DNA中的内毒素，可以直接将此步所得的DNA溶液用于去内毒素处理。如果DNA浓度太低，可以另购本公司的核酸浓缩剂进行浓缩。

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