CAT#:JW-221176-50
常温运输及保存

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（过柱法）

产品及特点
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，它具有下列特点:
1.高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关）。
2.快速，整个过程只需要十余分钟。
3.洗柱液不需要额外加乙醇。
4.两用，既可用于琼脂糖胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。
5.范围广，回收DNA的长度范围为50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。
6.最大吸附量为10ug。
7.回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。
8.本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），足够纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250uL）。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成份                                            编号        规格       包装材料
通用溶胶液                               220647        25 mL    30mL本色瓶
吸附柱活化液                            221176a    25 mL    30 mL本色瓶
通用洗柱液                               220143      50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                               220144     50 套      塑料袋
DNA洗脱液（胶回收专用）     221150      10 mL    10mL本色瓶
使用手册                                  221176sc    1份        无

运输及保存
常温运输及保存，有效期为一年。由于通用溶胶液是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要60℃加热溶解后才可以使用。

自备试剂
异丙醇

使用方法
1.用自备的干净刀片切取含DNA片段的琼脂糖凝胶（100 mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的1.5 mL塑料离心管中称重，按重量比为1：2的比例加入通用溶胶液 (0.1 g的琼脂糖凝胶需要加入0.2mL的通用溶胶液)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于2%，则需要按1：3的比例加入通用溶胶液。
2.50℃保温10分钟使胶完全溶化，每隔2-3分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下，建议不要50℃保温，而是延长溶胶时间，以免DNA变性，影响回收率。
3.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000 rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。
5.将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置3分钟。注意：静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的最大上样体积为0.8mL，若溶胶液的总体积大于0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。
6.12000-15000 g室温离心1分钟，倒掉收集管中的穿透液。
7.加入0.7mL通用洗柱液于离心柱中，12000-15000 g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的DNA用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序）,建议加入通用洗柱液后静置2-5分钟再离心。
8.12000-15000 g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
9.将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管中，加入50 uL DNA洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。注意：如果回收的DNA用于测序，则可用重蒸水洗脱DNA。DNA洗脱液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脱液时，回收率可能稍有降低。
10.静置3分钟后12000-15000 g离心1分钟。
11.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得DNA溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的DNA。
12.用电泳方法或测OD方法确定回收所得DNA的浓度。如果DNA浓度低，也可能低于测OD的分光光度计的检测极限之下，此种情况下就不能用此法。
注意事项
1.通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。
2.琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100 mg琼脂糖凝胶为宜。
3.如果在5-10分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。
4.胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
5.洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
6.增大DNA洗脱液使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。

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