CAT#:JW- 221167
常温运输和保存
有两个需要低温运输

石蜡包埋切片RNA纯化试剂盒（沉淀法）

产品及特点
石蜡包埋切片是珍贵的分子生物学研究材料，但是其保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行RT-PCR的RNA样本，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门开发的、用于从石蜡包埋切片中快提RNA的试剂，具有下列特点：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.适用于甲醛固定和非甲醛固定的两类切片。
3.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
4.沉淀法，比过柱法和磁珠法能更好的回收高度降解的RNA片段。
5.能有效去除基因组DNA的污染，避免DNA的干扰。
6.得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
7.本产品足够30次微量提取，每次可以处理5片切片。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品用小扁盒包装
成份                                                编号      规格     包装材料
石蜡包埋切片RNA纯化溶液A    221167a    30 mL    30 mL本色瓶
石蜡包埋切片RNA纯化溶液B    221167b    3 mL     5 mL本色瓶
蛋白裂解液                                221167c    5 mL     5 mL本色瓶
RNA提取液                               221167d    15 mL    15 mL本色瓶
微量核酸沉淀剂                         220313     30 mL    30 mL本色瓶
RNase-free水                            980403      1 mL    1.5 mL本色管
使用手册                                    220617sc    1份    1份

运输及保存
常温运输和保存，RNA提取液需4℃保存，蛋白裂解液需要-20℃放置。有效期一年。

自备试剂
氯仿、75%乙醇。

使用方法
1.将5片厚度为6-8 μm的石蜡包埋切片转移到1.5 mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1 mL石蜡包埋切片RNA纯化溶液A，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
2.加入75 μL石蜡包埋切片RNA纯化溶液B，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
3.7,000×g室温离心2分钟，溶液将形成上下两个相，其中组织切片位于下层。
4.小心吸弃上层液体。
5.将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6.加入150 μL蛋白裂解液，55℃保温过夜。
7.短暂离心，95℃保温10分钟。
8.加入0.5 mL RNA提取液，充分震荡半分钟。
9.加入0.1 mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
10.13,000-5,000×g室温离心3-5分钟。
11.将上清液（约0.6 mL）转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中。下层有机相（蓝色）和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100 μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
13.14,000×g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
14.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1 mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
16.14,000×g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
18.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50 μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50 μL RNase-free水使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
20.RNA完整性的电泳检测：
21.RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH 7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
22.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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