CAT#:JW-221150-50
常温运输及保存

酵母质粒DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是专门用于提取酵母质粒DNA的产品(不适用于酵母dsRNA质粒)。是根据酵母细胞壁十分坚硬的特点，在细菌质粒碱裂解法的基础上，增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤，可在1小时左右得到可以用于PCR或转化酵母质粒DNA。本产品具有以下特点：
1.即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。
2.实验快速，整个过程只需要一个小时左右，可同时处理多个样品。
3.得到的酵母质粒DNA纯度高，可直接用于转化和PCR等实验。
4.可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。
5.安全，不需使用玻璃珠、酚、氯仿等试剂。
6.每5-10mL酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。
7.酵母质粒DNA纯化溶液C中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。
8.本产品足够50次的酵母质粒DNA微量提取。
9.本产品只用于科研。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成分                                               编号                   规格      包装
酵母质粒DNA纯化溶液A                221150a        30mL     30mL本色瓶
酵母质粒DNA纯化溶液B                221150b        13mL     15mL本色瓶
酵母质粒DNA纯化溶液C               221150c        13mL     15mL本色瓶
酵母质粒DNA纯化溶液D               221150d        18mL     30mL本色瓶
破壁酶（干粉，真菌破壁用）      11-L220743    50mg     0.5mL本色管
RNase A溶液（10mg/mL）        5-797              0.15mL    0.5mL红盖管
离心吸附柱                                  220144            50套      塑料袋
通用洗柱液                                    220143         50mL     60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125        10mL     10mL本色瓶
使用手册                                       221150sc        1份      无

运输及保存
常温运输和保存，其中破壁酶和RNase A溶液需要低温运输，-20℃保存有效期一年。

自备试剂
无菌水

使用方法
1.将5-10mL酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5mL塑料离心管中。每转移一次后，需要14000×g室温离心1分钟，然后吸弃液体培养基。注意：不要使用培养时间超过16小时的酵母液体培养物，否则质粒DNA产量偏低；也不要使用超过10mL的酵母液体培养物，否则破壁不充分，降低质粒DNA产量。
2.加入1mL自备的无菌水，充分震荡混匀，14000×g室温离心1分钟，吸弃上清。
3.加入600μL酵母质粒DNA纯化溶液A，充分震荡细胞沉淀重悬，95℃保温10分钟。
4.14000×g室温离心1分钟，弃上清液。
5.加入250μL含破壁酶的酵母质粒DNA纯化溶液B(配制方法是将本试剂盒提供的50mg粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13mL酵母质粒DNA纯化溶液B的塑料瓶中，轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存，否则破壁酶很容易失去活性)，吹打混匀。
6.37℃保温30分钟，延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。注意：放置较长时间后，酵母质粒DNA纯化溶液B中的裂壁酶会逐渐失活，额外再加入一些裂壁酶（如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme等，总浓度为1mg/mL）可以极大提高产量。
7.将离心管放冰浴冷却后，加入250μL酵母质粒DNA纯化溶液C，轻轻颠倒混匀溶液蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠，然后室温放置5-10分钟。注意：不要剧烈震荡，否则基因组DNA将断裂并污染质粒DNA。
8.加入350μL酵母质粒DNA纯化溶液D，轻轻颠倒混匀几次，溶液由蓝色变成无色，将有白色絮状沉淀产生，然后冰浴放置10-30分钟（如果质粒较长，最好放置30分钟）。
9.14000×g室温离心6-10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中。注意：不要将漂浮在液面的沉淀物（如果有的话）转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。
10.室温下放置至少2分钟以让质粒DNA充分结合到离心吸附柱上。
11.14000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
12.将500μL通用洗柱液加入离心吸附柱中，14000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
13.重复上步操作一次。
14.14000×g室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略，否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR和转化实验。
15.将离心吸附柱套在一干净的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL DNA洗脱液（基因组纯化专用）（加入的量取决于预期的DNA浓度）至离心吸附柱的膜的中央。
16.室温下放置至少2分钟。
17.14000×g室温离心1分钟以洗脱DNA。
18.如有必要，可以再加入适量DNA洗脱液（基因组纯化专用）洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA的产量约为第一次的30-50%。不要将已经洗脱的、含DNA的溶液再加上去。

关联产品
酵母线粒体DNA纯化试剂盒（测序级，沉淀法）