CAT#:JW-221010
常温运输和保存

液体样品蛋白纯化回收试剂盒

产品及特点
本产品专门用于对液体样品进行蛋白提取浓缩、脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。本产品具有下列特点：
1.适用于各种液体样品，包括蛋白溶液、胞浆提取液、胞核提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等。也适于原代或传代细胞悬液。
2.灵敏，对一般蛋白样品，最低浓度可达1 μg/mL；对含SDS的样品，最低浓度为5 μg/mL。
3.蛋白回收率95-100%，远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除样品中的脂质，不影响后续SDS-PAGE和Western Blot等生物实验
4.得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性，没有活性。
5.能有效去除液体样品中的盐（1 M）、还原剂（1%巯基乙醇或DTT）、去垢剂（5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40）和油脂等。
6.操作方便迅速，只需要混匀后离心，不需要其他仪器。
7.产品稳定，可室温长期放置。

规格及成分
成分            编号            规格       包装
溶液A         221010A     0.5 mL    0.5 mL本色管
溶液B          221010B    1 mL      5 mL棕玻瓶
溶液C         221010C    50 mL     50 mL本色瓶
使用手册    221010sc    1份        1份
本产品使用小扁盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备物品
1M Tris-HCl，pH 8.8

使用方法
使用方法一（用于不含SDS的液体样品，但样品蛋白浓度不能低于1 μg/mL）
1.将100 μL需要液体蛋白样品转移到一个自备的1.5 mL塑料离心管中。
2.加入10 μL溶液A，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3.冰上放置15分钟。
4.加入10 μL溶液B，轻轻混匀。
5.冰上放置60分钟。
6.4℃12,000-15,000×g离心10分钟。
7.小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
8.加入1 mL冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃12,000-15,000×g离心15分钟。
9.小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
10.短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。
11.样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质污染，必须加少量自备的1 M Tris-HCl（pH 8.8）缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。
使用方法二（用于含SDS的液体蛋白样品，但样品蛋白浓度不能低于5 μg/mL）
1.将200 μL液体蛋白样品转移到一个自备的1.5 mL塑料离心管中。
2.加入8 μL溶液B，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3.冰上放置30分钟或-20℃放置15分钟（过夜放置更好）。
4.4℃ 12,000-15,000×g离心15分钟。
5.小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
6.加入1 mL冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃ 12,000-15,000×g离心15分钟。
7.小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
8.短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。
9.样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质污染，必须加少量自备的1 M Tris-HCl（pH 8.8）缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。

技术资料
TCA与蛋白质
TCA与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用：
1.在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐。
2.作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露较多的疏水性基团，使之聚集沉淀。
3.随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显。
4.电泳图谱显示，BSA，HSA单体谱带有较明显的展宽现象，这可能是由于TCA的结合，使SDS与蛋白质的结合量产生偏差，从而造成蛋白质所带电荷的不均一性，造成迁移率的不一致。我们认为在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时，对于分子质量大的蛋白质，要慎重选择TCA。对小分子量蛋白质的浓缩，采用TCA时也有两点需要注意：一是用TCA沉淀后，尽量用丙酮彻底抽提TCA；二是样品处理后要尽快进行电泳分析，以免发生聚集及断裂，造成结果分析的不准确。

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