CAT#:JW-220956-50
常温运输和保存

PAGE凝胶蛋白回收试剂盒（过柱法）

产品及特点
SDS-PAGE电泳不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一。随着蛋白质技术的微量化，可以从PAGE凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、用于免疫印迹实验、用于氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门针对此用途开发的PAGE凝胶蛋白回收试剂盒，它具有下列特点：
1.简单，不需要购买复杂而昂贵的仪器设备（如电洗脱仪）。
2.适用于变性胶（SDS-PAGE）、非变性胶（如Blue PAGE）和其他任何PAGE凝胶。
3.蛋白的回收率一般在50-90%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。
4.回收的蛋白可用于后续多种实验，包括2-D电泳、质谱测序、抗体制备等。
5.本产品足够50次微量蛋白纯化。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用小扁盒包装
成份                                                    编号        规格        包装
过柱法PAGE凝胶蛋白回收溶液A    220956a    10 mL    10 mL本色瓶
离心吸附柱                                      220144       50个     塑料袋
使用手册                                         220956sc    1份      1份

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
无

使用方法
1.按常规方法进行变性SDS-PAGE、尿素-PAGE，Tricine-SDS-PAGE电泳，或非变性蛋白电泳，如Bule PAGE。由于PAGE凝胶固定和染色后，蛋白回收效果很差，所以建议把蛋白样品同时上样到多个孔中并电泳。
2.电泳结束后，在对PAGE凝胶进行固定和染色时，切下其中一个样孔所对应的胶条进行固定和染色，其余的不固定不染色。
3.将出现蛋白条带后的胶条放回到在整个PAGE胶中此胶条切除前的位置，通过胶条上的蛋白条带来找到在未染色胶上该蛋白预计出现的区域，并切下此区域的PAGE凝胶（含未固定和为染色的目的蛋白）进行回收。
4.去除含目的蛋白的胶条的多余凝胶，否则它们会影响蛋白回收效率。
5.将修整后的PAGE胶条转移到一个干净的1.5 mL塑料离心管中，放-80℃过夜。
6.同时将一个非常干净的研钵和研磨杵放-20℃过夜。
7.次日，将凝胶倒入用研钵中，用研磨杵研磨成粉。
8.将凝胶粉转移到一个吸附柱中。
9.加入100 μL过柱法PAGE凝胶蛋白回收试剂溶液A，放置10分钟。期间，凝胶将膨胀，继续补加，直到凝胶不再膨胀并且凝胶上层覆盖1-2 mm厚的液体。
10.室温12,000×g离心3分钟，收集穿透液，并转移到新的离心管中，标注为穿透液1。
11.再加入过柱法PAGE凝胶蛋白回收试剂溶液A，使得凝胶上层覆盖1-2 mm厚的液体。
12.室温12,000×g离心3分钟，收集穿透液，并转移到新的离心管中，标注为穿透液2。
13.测定穿透液中的蛋白浓度或长度，可以直接进行后续实验，也可以放-20℃长期保存。

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