CAT#:JW-220957-250
常温运输和保存

Bradford法蛋白定量试剂盒

产品及特点
Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由465nm转移到595nm，通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品，具有以下特点：
1.快速，10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2.稳定，加样混匀后2分钟既可测定，1小时内吸光度变化不超过10%。
3.线性范围在50～1000µg/mL。
4.最小测量体积为1-20µL，最低测量蛋白量为0.5µg。
5.即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
6.有常规和微量两种检测模式。
7.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8.受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
9.本产品至少可以按常规法测200次，按微量法测1000次。
10.本产品只能用于科研。

规格及成分
成分                                                        编号           规格        包装
Bradford法蛋白定量溶液A                    220957a      250mL    250mL棕色瓶
牛血清白蛋白(BSA)标准品，2mg/mL    220565      1mL        1mL本色管
使用手册                                               220957sc    1份            无
本产品采用大立盒包装

运输及保存
常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂
超纯水、分光光度计、定性滤纸（直径12.5cm）

使用方法
一、制备溶液A工作液
1.将试剂盒提供的Bradford法蛋白定量溶液A与自备超纯水按1：4比例充分混合即为溶液A工作液(例：4mL溶液A+16mL超纯水=20mL溶液A工作液)。每次配制多少取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面手册计算。
2.用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液A工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2星期。注意：不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。

二、制备BSA标准品梯度稀释液
3.测试开始之前，应首先制备BSA标准品梯度稀释液。本试剂盒使用BSA作为标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度具体需要多少体积取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计算。没有用完的BSA标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。
如果进行常规检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将BSA（2mg/mL）稀释成下面的8个浓度：
0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、
500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL
如果进行微量检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将BSA（2mg/mL）
稀释成下面的6个浓度：
0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。

三、常规检测流程
常规检测法在蛋白浓度30-1000µg/mL范围内呈现R2=0.996的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
4.在标记的离心管中分别加入N个待测蛋白样品和8个BSA梯度稀释液，然后再在每个离心管中按1:50的比例加入溶液A工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。
如果用3mL比色杯检测，则取100µL样品+5mL溶液A工作液；
如果用1mL比色杯检测，则取40µL样品+2mL溶液A工作液；
如果用平底透明96孔板，则取20µL样品+1mL溶液A工作液。
5.样品与溶液A工作液混合后，充分震荡30秒混匀。
6.室温放置5分钟。
7.分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用96孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
8.将待测样品的测定值逐一跟用BSA梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。

四、微量检测流程
此方法在蛋白浓度1～20µg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
9.在标记的离心管中分别加入N个待测蛋白样品和6个BSA梯度稀释液，然后再在每个离心管中按4:1的比例（注意：不是1:50）加入溶液A工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。
如果用3mL比色杯检测，则取4mL样品+1mL溶液A工作液；
如果用1mL比色杯检测，则取2mL样品+0.5mL溶液A工作液；
10.如果用平底透明96孔板，则取400µL样品+100µL溶液A工作液。样品与溶液A工作液混合后，充分震荡30秒混匀。
11.室温放置5分钟。
12.分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用96孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
13.将待测样品的测定值逐一跟用BSA梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。

关联产品
改良Bradford法蛋白浓度测定试剂盒（直接测SDS-PAGE上样液中的蛋白）