CAT#:JW-220959B
常温运输和保存
但有一个低温成分

SDS-PAGE电泳试剂盒

产品及特点
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为了解决此问题，本公司开发了本产品。它具有下列特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2.安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3.灵活，用于可以用30%的丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺母液，自行配制各种浓度的PAGE胶，满足分离不同大小蛋白质的需求。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。
5.本产品只能用于科研。

规格及成分
下列成分用大纸盒包装，常温运输
成份                                          编号                 规格         包装
丙烯酰胺/甲叉双丙烯
酰胺干粉（19:1）                   220959a            57g+3g    250 mL棕色瓶
4×分离胶缓冲液                     5-475                 200 mL    250 mL本色瓶
4×浓缩胶缓冲液
（无染料）                           220959B-a          100 mL    125 mL本色瓶
TEMED                                CAS:110-18-9      1.5 mL    1.5 mL棕色管
过硫酸铵                              CAS:7727-54-0    1 g           1.5 mL蓝盖管
SDS-PAGE电泳液干粉         220996                184 g×2    250 mL本色瓶
使用手册                               220959B-sc          1份            1份

下列成分塑料袋包装，低温运输
成份                                 编号       规格     包装
5×SDS-PAGE上样液    220624    1 mL    1.5 mL绿盖管

运输及保存
常温运输和保存，但5×SDS-PAGE上样液需低温运输，-20℃保存。有效期一年

自备试剂
去离子水

使用方法
注意：第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（30% AB溶液，下同）
1.在本产品提供的装有57 g丙烯酰胺/3 g甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL自备的去离子水，充分摇晃10-20分钟即得200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（以下简称30%AB溶液）。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在19:1时，PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。配好的30% AB溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。
2.根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根 据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表:
蛋白质大小范围(kD)    最佳浓缩胶浓度    最佳分离胶浓度
15-45        4%        15%
15-60        4%        12.5%
18-75        4%        10%
30-120        4%        7.5%
60-200        不需要        5%
注：如果上样体积少于10 μL，可以不需要浓缩胶。
3.配制10%的APS（过硫酸铵）：称0.1克过APS干粉到1 mL去离子水中，摇晃溶解。没用完的10%APS溶液需4℃存放，一周后就不能再用。
4.配制分离胶溶液：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的AB溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10 mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。
分离胶浓度    用量（单位：mL）
               水    30%AB 溶液    4×分离胶缓冲液
5%       5.83       1.67                   2.50
6%       5.50       2.00                   2.50
7%       5.17       2.33                   2.50
7.5%    5.00       2.50                   2.50
8%       4.83       2.67                   2.50
9%       4.50       3.00                   2.50
10%     4.17       3.33                   2.50
11%     3.83       3.67                   2.50
12%     3.50       4.00                   2.50
13%     3.17       4.33                   2.50
14%     2.83       4.67                   2.50
15%     2.50       5.00                   2.50
16%     2.17       5.33                   2.50
5.配制浓缩胶溶液（一般使用4%的浓度）：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%AB 溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10 mL 4%浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
浓缩胶浓度    用量（单位：mL）
                   水       30%AB 溶液      4×浓缩胶缓冲液（无染料）
4%           6.17               1.33                   2.50
6.将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应，胶凝固时间会更长）。
7.各加入50 μL 10%APS和40 μL TEMED（这是配制10 mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
8.先灌分离胶，在分离胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
9.由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的交接面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。也可以等分离胶在室温聚合30-60分钟，胶凝固后再灌制。
10.拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L去离子水中即得10×SDS-PAGE电泳液（测pH应该在8.3，如果不是8.3务必用NaOH或HCl调到8.3），用时再用去离子水稀释成1×工作液。
11.将凝胶板固定在电泳装置上，往上下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。
12.在待电泳的蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4 μL样品中加1 μL上样液)，100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。
13.先用 10 mA 的电流电泳（对0.75 mm厚×14 cm×14 cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
14.将电流增加到 15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的染色等实验处理。

关联产品
改良Bradford法蛋白浓度测定试剂盒（直接测 SDS-PAGE上样液中的蛋白）