CAT#:JW-220802
常温运输和保存

外泌体DNA-RNA纯化试剂盒（沉淀法）

产品及特点
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡 (40-100 nm)，主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关其分泌、摄取、组成、“运载物”及其相应功能的精确分子机制的研究还处于起步阶段。但从外泌体提取核酸（主要是RNA）非常棘手，为此本公司开发了外泌体核酸（DNA和RNA）纯化试剂。本产品具有下列特点：
1.一管式操作，在同一试管中完成，减少样品丢失。
2.沉淀法，不使用离心柱，能有效避免小RNA的丢失。
3.能同时提取RNA（包括RNA和miRNA）和DNA。
4.回收率达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
5.无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
6.本产品只能用于科研，不能。用于临床

规格及成分
成份                                            编号          规格     包装材料
外泌体DNA-RNA纯化溶液A    220802a        30 mL    30 mL本色瓶
外泌体DNA-RNA纯化溶液B    220802b        35 mL    60 mL本色瓶
外泌体DNA-RNA纯化溶液C    220802c        50 mL    60 mL本色瓶
RNase-free水                           980403        1 mL     1.5 mL本色管
使用手册                                220802sc        1份             1份
本产品使用小扁盒包装

运输及保存
常温运输保存，但外泌体核酸提取溶液A长期保存需要放4℃。有效期一年。

自备试剂
外泌体。

使用方法
一、制备外泌体（本试剂盒不提供相关试剂）
注意：自备的外泌体需要立即使用或放-80℃长期保存。用于核酸提取的外泌体可以是沉淀，也可以是重悬液。

二、外泌体核酸提取
1.从冰箱取出外泌体DNA-RNA纯化溶液A，放室温或握在手上融化，直到没有任何晶体，再充分摇匀待用。
2.标记1.5-2 mL螺旋盖塑料离心管。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。最好在每个管盖上做个标记，以在下步离心时有意将标记方向朝向心面或离心面。
3.将不超过200 μL的外泌体重悬液加入到标记好的塑料离心管中。
4.每管中加入600 μL外泌体DNA-RNA纯化溶液A，盖上盖子后振荡数秒混匀。
5.室温放置3分钟。
6.加入0.7 mL外泌体DNA-RNA纯化溶液B，旋紧盖后振荡30秒混匀。
7.14,000×g室温离心至少15分钟。注意：离心时如果把标记固定朝向心面或离心面，则在后面的操作均得按此朝向进行离心。
8.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（此时可能看不见）。
9.加入1.0 mL 外泌体DNA-RNA纯化溶液C, 振荡数秒.
10.14,000×g室温离心5分钟。
注意：离心管标记的朝向要跟上面的一致。
11.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（可能在离心管内壁的离心面呈膜状）。
12.再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体（约50 μL）。
13.加入200 μL RNase-free水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状沉淀。如果溶液稍呈混浊状属于正常。
注意：所得溶液即为外泌体核酸溶液。如果只需要RNA，必须去除DNA，则另外用自备的RNase-free DNase对DNA污染进行降解。反之如果只需要DNA，必须去除RNA，则另外用自备的DNase-free RNase对RNA污染进行降解。
14.直接取适量用于后续实验。样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

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