CAT#:JW-220726-50
常温运输和保存

血液RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门从动物全血样品中快速提取总RNA，它具有下列特点：
1.直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右。
2.可以全在室温下进行。
3.产量和纯度高。OD260/280一般在2.0左右，产率一般为2-5 ug/mL人血，可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
4.每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5 mL，高于大多数同类产品。
5.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                编号            规格    包装
血液RNA纯化溶液A      220726a    50 mL    60mL本色瓶
血液RNA纯化溶液B      220726b    15 mL    15mL棕色玻璃瓶
血液RNA纯化溶液C      220726c    50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                    220144      50套      塑料袋
通用洗柱液                    220143      50 mL    60mL本色瓶
RNA洗脱液                    971207     10 mL    10mL本色瓶
使用手册                       220726sc    1份        无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.将0.2-1.5 mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料离心管中。
2.14000 g室温离心3分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL， 则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
3.将1 mL血液RNA纯化溶液A加入到血液细胞沉淀中，用移液枪充分吹打沉淀使细胞裂解。
4.将0.3 mL的血液RNA纯化溶液B加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
5.和0.2 mL自备氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
6.14000 g室温离心3分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过0.7 mL，否则下一步不能加入等体积的血液RNA纯化溶液C。为防止污染，最好留100 uL左右的上清液不取。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。
7.加入等体积的血液RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。
8.分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后14000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
9.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
10.如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高RNA的纯度。
11.室温14000 g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的后续反应。
12.将离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free的收集管中，加入50 uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13.14000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14.电泳检测RNA完整性：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
15.在NanoDrop上测浓度和纯度。
16.立即用于后续实验，或放-80℃保存。

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