CAT#:JW-220725-200
低温运输，-20℃保存

单细胞逆转录试剂盒

产品及特点
单细胞是非常重要的实验材料，但是由于单细胞中的RNA很少，一个人体细胞只有6pg的基因组DNA，一个小鼠胚胎干细胞只有2万多个mRNA分子，一个小鼠成纤维细胞只有50万个mRNA分子。因此单个细胞根本没法用来进行核酸纯化。为了克服次缺点，本公司开发了单细胞逆转录试剂盒，它具有下列特点：
1.直接用1-500个细胞进行逆转录，免去RNA纯化过程中不可避免的RNA丢失。
2.得到的cDNA可以用于RT和PCR分离的两步法RT-PCR，方便用户用珍贵的cDNA进行更多靶基因的后续染料法或探针法qPCR检测。
3.所含RNA保护剂可有效抑制RNA的降解。
4.所含保护剂能有效克服痕量RNA因非特异性吸附产品的丢失。
5.本产品足够进行200次5L体系的单细胞裂解和200次10L体系的逆转录。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
成份                                       编号            规格        包装材料
单细胞裂解液（RNA专用）    220107       1 mL    1.5mL本色盖
5×单细胞RT Buffer A              220725a     400 L    0.5mL白盖管
5×单细胞RT Buffer B             220725b      400 L    0.5mL绿盖管
单细胞专用MMLV                    220725c     100 L    0.5mL红盖管
使用手册                                  220725sc    1份        无
本产品使用五孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂
制备单细胞所需试剂

使用方法
1.用户需要根据样本细胞种类选用合适的方法（如胰酶消化）制备单细胞悬液，对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如卵细胞），则可以跳过此步。本试剂盒不含相关试剂。
2.将5.5L单细胞裂解液（RNA专用）预先分装到0.2mL PCR管中或96孔板中，分装的管数根据样品数决定。
3.用流式细胞仪或在倒置显微镜下用液压显微操作器将1-500个细胞转移到上步所得的、预装了裂解液的PCR管或96孔板中。
4.细胞进入裂解液后，裂解即发生。细胞裂解后在常温最多只能放5小时。如果不需要立即使用，必须将样品放-80℃长期保存。细胞裂解液可以反复冻融最多5次。
5.如果立即使用，则在裂解样品中加入2L 5×单细胞RT Buffer A。
6.65℃保温5分钟后立即放冰上。
7.加入2L 5×单细胞RT Buffer B。
8.加入0.5L单细胞专用MMLV，轻柔吹打混匀，总体系为10L。
9.在PCR仪上按下列参数进行逆转录反应：25℃保温5分钟，50℃保温60分钟，55℃保温15分钟，70℃保温15分钟。
10.所得cDNA可以直接用于后续PCR，也可以放-20℃长期保存。
后续染料法qPCR：本产品不含相关试剂，操作过程仅供参考。
11.加入50L自备超纯水到10L cDNA中稀释cDNA。
12.取3L上步所得cDNA稀释液作为PCR模板，加入浓度为4M的自备PCR引物各1L，加入5L 2×染料法PCR Mix，总体积为10L。
13.根据选定的PCR程序进行染料法qPCR并进行溶解曲线分析。

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