CAT#:JW-220952-5
常温运输和保存

蛋白胶中量回收试剂盒（沉淀法）

产品及特点
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法，它具有下列特点：
1.简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）。
2.适用于变性PAGE胶（如SDS-PAGE）和非变性PAGE胶。
3.每次可以处理1 g的PAGE胶（具体含多少蛋白质取决于上样的浓度）。
4.回收率一般在50-90%之间（跟蛋白质亲水性、大小、洗脱时间相关）。
5.跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序、EMSA或其它活性检测实验等。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用小扁盒包装
成份                                    编号           规格       包装
蛋白胶中量纯化溶液A        220952a    5mL       5 mL本色瓶
蛋白胶中量纯化溶液B        220952b    50 mL    50 mL本色瓶
20mL塑料注射器                220952c    5只       塑料袋
使用手册                            220952sc    1份       无

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
无

使用方法
1.按常规方法进行变性（SDS-PAGE）或非变性PAGE蛋白电泳。
2.切取含目的蛋白条带的PAGE胶（尽可能地把多余的胶切除，否则会影响回收效率）。注意：PAGE胶固定和染色后蛋白回收效果很差，所以建议把样品分多孔上样，电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色，然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置，通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域，并切下此区域的胶进行回收。
3.将切下的、重量不超过1克的胶块转移到20 mL塑料注射器中（不安装针头）。用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去，使之变成细小的碎片，用自备的15mL塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。也可用其他方法捣碎PAGE胶条，包括液氮研磨。胶条越碎，蛋白回收率越高。
4.加入1 mL蛋白胶中量纯化溶液A，4℃脱色摇床上摇晃洗脱至少16小时（过夜）。此期间最好将蛋白胶中量纯化溶液B放在-20℃冰箱预冷待用。
5.10,000 g离心10分钟，转移上清（含回收蛋白）到新的10-15mL的塑料离心管中，注意不要吸取PAGE胶碎片。
6.加入5倍体积的预冷的蛋白胶中量纯化溶液B，摇晃混匀。
7.-20℃放置至少30分钟。
8.室温12,000 g（注意：一定要检查使用的离心管是否能够耐受此离心力，如果不能建议将溶液分到1.5 mL的塑料离心管中再在台式离心机上进行离心处理）离心20分钟，小心弃上清，不要吸走沉淀。
9.室温充分晾干，得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在跟后续测试兼容的缓冲液中，直接用于后续实验（2-D电泳、质谱测序等）。

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