CAT#:JW-220601-250
常温运输和保存

Tricine-SDS-PAGE配胶液，3×

产品及特点
Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此本公司开发了Tricine-SDS-PAGE电泳试剂盒。它具有下列特点:
1.一站式，提供除水和样品以外的所有成分。
2.即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
3.安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5.本产品可配30块mini胶
6.本试剂盒只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成分                                                               编号             规格           包装
丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺干粉(19:1)          981205-30a     60 g/3 g    250 mL棕色瓶
Tricine-SDS-PAGE配胶液，3×                  220601-250     250 mL      250 mL本色瓶
50%甘油                                                     981205-30b     25 mL       30 mL本色瓶
TEMED                                                       981205-30c     1.5 mL     1.5 mL棕色管
过硫酸铵                                                      981205-30d     1 g           1.5 mL本色管
Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液，2×            220417-5          1 mL×5    1.5 mL本色管
Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液（干粉）      981205-30e     10 L            250 mL本色瓶
Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液（干粉）      981205-30f        10 L            塑料热封袋
使用手册                                                       981205-30sc    1份           无

运输及保存
常温运输和保存（上样液需要-20℃保存），保存期为一年。

自备试剂
Milli-Q纯水或同等级别的去离子水、水饱和的异丁醇

操作流程
本公司强烈推荐在分离多肽时使用由4%浓缩胶、10%隔离胶和16%分离胶从上到下组成的三层Tricine-SDS-PAGE胶，下面为配制该胶的流程。如果用户不需要隔离胶或需要调整各种胶的浓度，请按比例修改。
1.配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（19：1）(丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液简称AB溶液，下同)：直接在装有60克丙烯酰胺和3克甲叉双丙烯酰胺的瓶中加入140 mL自备的去离子水，拧紧瓶盖后37℃水浴，其间颠倒摇晃多次，直到干粉全部溶解，得到30% AB溶液（19：1），该溶液最好4℃避光保存，在一个月内用完。AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
2.配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1 mL去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的1.5 mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可在4℃存放一周。过硫酸铵极其容易吸潮，没用完的过硫酸铵一定要拧紧盖子。如果吸潮，可用自备的分析纯过硫酸铵替代。
3.配制30 mL 16%分离胶和9 mL 10%隔离胶（足够灌两块0.75 mm×14 cm×14 cm胶）。
A)标记2个50 mL的三角瓶，按下表的用量加入各成分：
B)混匀后真空脱气10-15分钟。
C)灌分离胶：在分离胶瓶中加入150 mL 10%的APS溶液和30 mL TEMED溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将分离胶溶液沿着一个隔条的边缘加到玻璃板夹层中，直到溶液的高度距离玻璃上沿还有5 cm。由于分离胶比重比隔离胶大，故可在其凝固前直接灌隔离胶。
D)灌隔离胶：在隔离胶瓶中加入75 mL 10%的APS溶液和15 mL TEMED溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧隔条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到溶液离玻璃板顶部约3 cm高为止。
E)盖1cm高的自备水饱和的异丁醇使胶面跟氧气隔绝（氧气会抑制胶的凝固；此处水饱和的异丁醇可用水代替，但效果会差一些）。让分离胶和隔离胶在室温聚合30-45分钟。
4.配制9 mL 4%浓缩胶（足够灌两块0.75 mm×14 cm×14 cm胶）。
F)在一个50 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：
成份                                                    用量
30%AB溶液（19：1）                       1.2 mL
Tricine-SDS-PAGE配胶液，3×           3.0 mL
补去离子水到9 mL                               需加4.8 mL
G)混匀后真空脱气10-15 min。
H)将75 uL新鲜配制的10%的过硫酸铵溶液和15 mL TEMED溶液加入到溶液中，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧隔条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到夹层中的溶液离玻璃板顶部约1cm高为止。
I)插入0.75 mm厚的塑料梳子，再补加浓缩胶溶液填满梳子间的空隙。注意避免产生气泡。让浓缩胶在室温聚合30-45分钟。
5.小心拔出塑料梳子，在上层缓冲槽中加入1×Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液(下称阴极电泳液)，并用1×阴极电泳液冲洗加样孔。注：本产品提供10 升的阴极电泳液干粉，将所有干粉溶解在600-800 mL去离子水中，最后定容到1000 mL即得10×阴极电泳液，可以室温放置，不需要灭菌，用时再用去离子水稀释10倍成1×阴极电泳液。
6.在电泳装置的下层缓冲液槽中加入1×Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(下称阳极电泳液)。注：本产品提供10升的阳极电泳液干粉，将所有干粉溶解在600-800 mL去离子水中，用自备的浓盐酸调pH到8.9（25℃）后定容到1000 mL即得10×阳极电泳液，灭菌后可以4℃长期放置。用时再用去离子水稀释10倍成1×阳极电泳液。
7.在密封的螺盖微量离心管中，用2×Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液按1：1的比例稀释蛋白样品，于100℃煮沸3-5分钟。注意：如果样品是蛋白沉淀物，则加入50-100 mL新配的1×Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液溶解；如果样品是蛋白稀溶液，可先浓缩蛋白质。与Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液混合后的样品如未经100℃加热灭活蛋白酶，切勿放于室温。
8.上样。如果用考马斯亮蓝染色，对于成分复杂的蛋白质样品，上样量最好为20 uL（含25-50 mg总蛋白质）；对于只有一种或几种蛋白质的样品，上样量最好为1-10 mL。如果用银染，上样量可减少10-100倍。
9.电泳。先30 V恒压电泳1 h（对0.75mm×14cm×14cm的胶而言），然后150 V恒压电泳4-5 h。注：本产品的Tricine-SDS-PAGE上样液使用了考马斯亮蓝G-250作为指示剂，其泳动速度比最小的肽还快。
10.终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理（最好用银染染色，节约样品）。注意：考染或银染时，基本步骤同蛋白PAGE胶染色，只是任何一步（尤其是固定步骤）的处理时间都不要超过20分钟，否则多肽非常容易扩散出PAGE胶而降低检测的灵敏度。

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