货号：JWSH1201                                                   规格：50管/48样
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
GSH/GSSG 是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及
GSH/GSSG 比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。

测定原理：
利用2-VP法测 GSSG含量。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 支，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入5 mL蒸馏水溶解，4℃保存。
试剂六：液体×1 瓶，-20℃保存。临用前加入0.5 mL蒸馏水稀释，4℃保存。
标准液：液体×1 瓶，3μmol/mL GSSG，4℃保存。

粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清液（如上清不清澈，再离心 3min）100μ L，加 900μ L 的蒸馏水混匀待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；8000g 4℃离心 10min，取上清液（如上清不清澈，再离心 3min）100μL，加900μ L 的蒸馏水混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。

测定操作:
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2.试剂三置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中保温 30min。
3.标准管：取 1 mL EP 管，加入100μL 标准液，2μL 试剂二，盖紧后混匀，置于 37℃水浴 30min；开盖后依次加入700μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，10μL试剂六，迅速混匀后，测定 30s 和 150s 光吸收 A1和 A2。
4.测定管：取 1 mL EP 管，加入 100μL 上清液，2μL试剂二，盖紧后混匀，置于37℃水浴 30min；开盖后依次加入700μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，10μL试剂六，迅速混匀后，测定30s和150s光吸收A3和 A4。
注意：标准管只需要测定一次。

GSSG  含量计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
GSSG（μmol/mg prot）=C 标准液×（A4－A3）÷(A2－A1)×V 反总÷(V 样×Cpr)
=30.36×（A4－A3）÷(A2－A1)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
GSSG（μmol/g）=C 标准液×（A4－A3）÷(A2－A1)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=30.36×（A4－A3）÷(A2－A1)÷W
(3). 按细胞数量计算
GSSG（μmol/10 4  cell）=C 标准液×（A4－A3）÷(A2－A1)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=30.36×（A4－A3）÷(A2－A1)÷细胞数量
(4). 按照液体体积计算
GSSG（μmol/mL）=C 标准液×（A4－A3）÷(A2－A1)×V 反总÷V 样
=30.36×（A4－A3）÷(A2－A1)
C 标准液：3μmol/mL GSSG；V 反总：反应总体积，1.012mL；V 样：反应中加入样本体积，
0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

注意事项：
1. 提取过程中去掉蛋白质，所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2. 临用前配制的试剂配好后 4℃保存，3 天内使用完毕。
3. 最低检出限为 1mmol/L。