纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在已知浓度ADP存在（III态呼吸）的情况下氧浓度的降低，来分析磷氧比（P：O ratio），以评价线粒体呼吸链和氧化磷酸化偶联程度，即能量转化效率的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体，即线粒体的呼吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应。线粒体每吸收一克原子氧的同时，生长ATP（ADP磷酸化）的克分子数的比值，为ADP/O值。线粒体的磷氧比直接表征线粒体呼吸耗氧和ATP合成的关系。正常线粒体的ADP/O（P/O）为1.5：磷氧比降低意味着线粒体解偶联；磷氧比增高意味着线粒体偶联良好。其最大值为3.3。

产品内容
介质液（Reagent A）        毫升
底物液（Reagent B）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备
CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度

实验步骤
实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽
2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀
3．密封反应槽
4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）
5．持续记录1分钟后，注射加入20微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）
6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升 底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑；参见注意事项9）
7．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
8．继续注射加入xx微升 底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）
9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
10．测算氧浓度降低值（微摩尔/毫升）：
11．计算ADP/O：

注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入
4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用线粒体分离试剂盒－G&VS10006.1
5．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入
6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升
7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高
8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡
9．加注 底物液（Reagent B）前，须充分冻融和混匀
10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量
11．氧浓度百分值转换为微摩尔/毫升：
公式=【测定值（百分值）÷20.9%（环境标准氧百分值）】X 0.237（系数；微摩尔/毫升）
12．本公司提供系列线粒体检测试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                    规格    
G&VS10098    纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒    20次    
G&VS10098A    介质液（Reagent A）                毫升
G&VS10098B     底物液（Reagent B）                毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                规格
G&VS10006.1    动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒    10/50次
G&VS10006.2    动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒    10/50次
G&VS10006.3    动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒    10次
G&VS10013.1    纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    100次
G&VS10013.2    活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20次
G&VS10013.3    完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20次
G&VS10013.4    活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    10次
G&VS10014.1    线粒体外膜功能检测试剂盒        20次
G&VS10015    线粒体功能詹纳斯绿B（JGB）染色试剂盒    20次
G&VS10019.1    活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100次
G&VS10019.2    植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100次
G&VS10019.3    真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100次
G&VS10059    纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒    20次
G&VS10095    线粒体膜通道孔（MPTP）检测试剂盒    20次
G&VS12198    纯化线粒体冻存液            50毫升
G&VS10097    纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒    20次
G&VS10098    纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒    20次
G&VS10101    纯化线粒体肿胀比色法测定试剂盒    50次
G&VS10102    活体细胞线粒体肿胀流式细胞仪测定试剂盒    20次