CAT#:JW-220608-50
常温运输及保存

粪便DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA，它具有下列特点：
1.操作简单快速，一个样品只需要十多分钟的时间。
2.DNA更加纯净，OD260/280一般都在1.8以上，得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR扩增。
3.每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品，能得到5 ug 左右DNA，片段长度在25 Kb左右。
4.可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。
5.试剂无毒无害, 环保。
6.本产品足够50次微量粪便DNA提取。
7.本产品只能科研使用。
规格及成分
成份                                                编号        规格       包装材料
粪便DNA纯化溶液A                    220608a     25 mL    30 mL本色瓶
粪便DNA纯化溶液B                    220608b     25 mL    30 mL本色瓶
粪便DNA纯化溶液C                    220608c     40 mL    60 mL本色瓶
离心吸附柱                                 220144        50套     塑料袋
通用洗柱液                                 220143        50 mL    60 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化用）    220125       10 mL    10 mL本色瓶
使用手册                                     220608sc    1份        无
本产品使用大纸盒包装

运输及保存
常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.65℃预热粪便DNA纯化溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2.称取0.1-0.3 g的粪便，加入到含预热的粪便DNA纯化溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5 mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的粪便震荡起来。
3.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4.14000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色随样品而异，上清液的体积一般为300-400 µL)。
5.在上清液中加入等体积的粪便DNA纯化溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6.将离心管冰浴至少5分钟。
7.14000 g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5 mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7 mL左右。
注意：下面第8和第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6 mL，否则没有空间加粪便DNA纯化溶液C。
8.加入0.2 mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9.14000 g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。将0.5 mL上清转移到新的1.5 mL离心管中。如果有多余的可以弃之不用。
10.加入0.8 mL的粪便DNA纯化溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11.分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液）。
12.加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
13.再加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000 g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14.14000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15.将离心吸附柱转移到一新的1.5 mL塑料离心管中，加入100 uL DNA洗脱液（基因组纯化专用）。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17.14000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。